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多肽文库构建服务
泰克生物致力于为客户提供高质量的多肽文库构建技术服务,为客户后续的多肽文库筛选、靶向多肽药物发现、特异性阻断多肽药物开发、特异性先导序列开发等下游研发工作提供有力支持。泰克生物在多肽文库构建方面拥有丰富的项目经验和心得,经过多年的发展,泰克生物建立了完善的多肽文库构建体系(包括但不限于依赖M13辅助噬菌体的M13噬菌体展示体系、M13 KE噬菌体展示体系、T7噬菌体展示体系等),能够为客户提供高质量的包括但不限于线性多肽文库(包括但不限于6肽库、7肽库、12肽库、15肽库)和环多肽文库(环6肽库、环7肽库、环10肽库等)等各种类型的多肽文库构建服务。
多肽文库构建服务是基于噬菌体展示技术(Phagepro Tech®)的文库构建服务,是指用通过Trimer Codon技术、NNK技术或Error-prone PCR技术等基因突变方法合成符合客户需求的基因库,然后构建至合适的噬菌体载体并转化至相应的宿主菌进行包装和扩增而获得的噬菌体文库。泰克生物建立的M13噬菌体多肽文库库容可达10^8,滴度可达10^13个噬菌体展示多肽颗粒/ml,T7噬菌体多肽文库库容可达10^8,滴度可达10^11个噬菌体展示多肽颗粒/ml,足够支撑客户后续筛选到针对各类靶点且满足下游实验需求的靶向肽。泰克生物可提供包括从多肽基因库设计与合成、多肽文库构建到配套的多肽文库筛选、亲和力验证、体外细胞验证等一站式技术服务,客户只需要提供具体的项目需求,泰克生物的科学家会针对客户的项目需求设计最佳的文库构建方式和噬菌体体系,满足不同客户的项目需求。
█ 多肽文库构建服务
泰克生物建立了两种M13噬菌体展示多肽文库体系,一是需要M13辅助噬菌体的M13噬菌体展示体系,即将合成的多肽基因库构建至pEMCS载体,通过转化、扩增、噬菌体包装(文库救援)等完成文库构建。二是M13 KE噬菌体展示体系,即将设计合成的多肽基因库构建至M13KE噬菌体,通过转化、扩增和蓝白斑筛选获得阳性克隆,无需进行文库救援。M13 KE噬菌体展示多肽文库构建流程如图1所示:
图1 M13 KE噬菌体展示多肽文库构建流程
█ 服务内容和周期
分类 | 服务内容 | 周期 |
多肽/环多肽基因突变库构建 | (1) Trimer codon技术/NNK技术/Error-prone PCR技术进行基因库合成 (2) 交付:基因库合成质量报告,3ug基因库 | 3-4周 |
M13噬菌体多肽/环多肽文库构建 | M13 KE噬菌体展示体系: (1) 噬菌体载体构建与转化 (2) QC鉴定:单克隆测序 + NGS测序 (3) 交付:构建好的带有目标环多肽/线性多肽的噬菌体文库,实验报告 需要M13辅助噬菌体的展示体系: (1) 噬菌体载体构建与转化 (2) 文库救援; (3) QC鉴定:单克隆测序 + NGS测序 (4) 交付:构建好的带有目标环多肽/线性多肽的噬菌体文库,实验报告 | 2-3周 |
█ 服务优势
-- 多种多肽文库可定制:线性肽库构建(包括但不限于6肽、7肽、12肽、15肽等)和环多肽库(包括但不限于环6肽、环7肽、环10肽等)
-- 多种突变体系可选:Trimer Codon技术连续饱和突变和非连续饱和突变、NNK技术饱和突变、Error-prone PCR技术突变以构建不同的突变多肽文库,满足不同客户的需求
-- 多种噬菌体体系:M13噬菌体体系(野生型M13噬菌体体系、需辅助噬菌体体系等)、T7噬菌体体系等
-- 多种载体可选:pEMCS载体(需辅助噬菌体体系)、M13 KE载体体系等
-- 高质量文库:M13噬菌体文库库容达10^8,滴度可达10^13个噬菌体/ml,文库多样性>90%;T7噬菌体文库库容可达10^8,滴度可达10^13个噬菌体/ml,文库多样性>90%;
-- 配套的下游筛选和验证实验:多肽文库筛选(固相筛选、液相筛选、细胞筛选、动物体内筛选等)、亲和力验证实验等
-- 一对一个性化方案定制(包括多肽的长度和结构设计、基因突变方案的设计、文库构建及筛选方案设计以及下游的亲和力验证、阻断验证方案设计等),满足各类客户的科研项目需求
-- 实验记录可追溯:中英文实验报告,原始实验记录
使用多样的起始多肽序列,包括天然蛋白序列、随机序列或已知的生物活性肽序列;采用多种文库构建方法,如合成DNA文库、cDNA文库或基因文库,以增加文库的多样性和质量。
优化文库构建的方法和步骤,包括优化文库构建的条件、扩增和连接多肽序列的效率,以及增加反应的产量和纯度。
通过文库设计时选择合适的多肽起始序列、引入多样性的序列或者在文库构建后进行特定多肽的添加和插入,以增加感兴趣多肽序列的覆盖度。
在文库构建时进行严格的筛选,剔除无功能的多肽序列;在后续的多肽筛选和鉴定过程中,进行高通量的筛选和验证,筛选出具有生物活性的多肽序列。
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