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抗体测序服务

泰克生物提供快速专业的抗体测序服务(包括:杂交瘤测序,抗体全长测序等),对编码杂交瘤细胞单克隆抗体重链可变 (VH)区域和轻链可变 (VL) 区域的基因序列进行测序。同时,泰克生物配备了先进的抗体全长测序技术,例如与串联质谱联用的液相色谱仪 (LC-MS/MS) 和配套的先进计算算法,可根据您的需求提供准确、快速的抗体全长测序服务。


█ 杂交瘤测序服务


泰克生物提供快速专业的杂交瘤测序服务,对编码杂交瘤细胞单克隆抗体重链可变 (VH)区域和轻链可变 (VL) 区域的基因序列进行测序。杂交瘤测序原理:杂交瘤技术是指建立杂交瘤细胞系的技术,其用于产生大量单克隆抗体,所以又称单克隆抗体技术。测序原理是通过RT-PCR技术从杂交瘤细胞中提取杂交瘤分泌的抗体序列进行分析。



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泰克生物可在4-6周内完成高通量(NGS)杂交瘤测序,并且为客户提供所有VH和VL序列以及一份完整的报告,告知客户杂交瘤细胞单克隆抗体的序列(包括单克隆抗体相对应的VH和VL序列的CDR区序列分析)和可能存在的任何异质性或其他抗体同种型。

经过杂交瘤测序,可以获得相应的序列,在后续项目中有需要用到单克隆抗体的时候,可以利用测得的基因序列进行重组抗体的制备。解决了杂交瘤保存过程中,细胞死亡或高特异性丢失的问题。杂交瘤测序,对于进一步的大规模生产及抗体的人源化等生物工程操作同样具有重要的意义。


█ 杂交瘤测序服务流程 



项目

内容

交付

周期

杂交瘤细胞抗体测序服务

RNA提取

反转录

PCR扩增VH和VL序列

测序验证

基因合成

表达载体构建

抗体VHVL序列

分别含有VHVL基因的表达载体(质粒构建QC)

2-3周



█ 服务优势 

-- 适用于任何物种

-- 使用随机引物,不会引入突变

-- 识别所有 VH 和 VL 序列并量化它们的相对丰度

-- 序列绝对保密性

-- 高通量方法可同时对多达 50 个杂交瘤进行测序 - 提供批量杂交瘤测序包

-- 序列在 3-4 周内交付



█ 抗体全长测序

 

有许多单克隆抗体无法获得杂交瘤细胞系。为了满足客户的对未知抗体序列(无杂交瘤细胞系)的测序要求,泰克生物还提供抗体全长测序服务,通过将质谱与从头肽测序和重叠肽组装相结合,确定可变域的氨基酸序列。抗体的全长测序是指在事先不知道DNA或蛋白质序列的情况下,推导抗体的氨基酸序列并发现任何相关的翻译后修饰的分析过程。

泰克生物保证提供功能性抗体序列以及具有完整序列覆盖率的综合测序报告。基于重组抗体瞬时表达服务,泰克生物可以在短短9周内对抗体进行测序并交付相应的重组蛋白。



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█ 样本要求

 

样本量:100μg单克隆抗体蛋白

浓度:>0.2mg/mL

纯度:目标抗体占总蛋白量的95%以上

其他:无相同抗原的抗体蛋白

█ 服务内容


质谱测序

抗体表达

周期

交付

酶消化成重叠肽;

使用 Thermo Orbitrap 的 LC-MS/MS

肽的从头鉴定;

肽组装;

基因合成

克隆

HEK293 细胞中的瞬时表达

亲和纯化

缓冲液交换 (PBS)

无菌过滤

纯度 >98% (SDS-PAGE)

内毒素 < 1 EU/mg

3-4

综合测序报告;

>2 mg 纯化抗体;

QC报告


█ 服务优势

-- 快速:测序可在10个工作日内完成

-- 高通量:我们的 DASS 方法是高通量兼容的

-- 专业:科学家负责每个项目,并配备专业团队在过程的每个步骤进行质量控制;专家研发团队致力于优化协议以提供更高质量的数据

-- 个性化:定制服务包括但不限于抗体设计、克隆、从头测序和分析,以及体外优化以满足您的需求

-- 准确性高:单独肽的多个质谱读数中获得了强信号峰特征,可以正确识别序列中的每个氨基酸。

-- 应用范围广:可用于所有类型的抗体(除了人类)。甚至已被用于对受污染或结合的抗体或成对具有不同轻链的抗体进行测序。

-- 信息丰富:抗体从头测序通常会导致检测到测序中的意外差异或蛋白质分子上的新糖基化位点,而DNA测序无法检测这些差异。


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抗体测序服务常见问题解答

  • 在测序过程中出现污染或杂交,导致序列结果不准确。

    严格控制实验操作,采取无菌技术和严格的实验室操作流程;定期检查仪器和设备的清洁和消毒情况;在样品处理和操作过程中,避免交叉污染和杂交现象的发生。

  • 获得的序列质量较低,包括序列长度不足、碱基误差或测序质量低。

    优化实验条件和测序方法,包括优化PCR反应条件、使用高质量的引物、选择合适的测序平台等;加强DNA样品的质量控制,如DNA纯化、修饰和浓缩等处理步骤。

  • 在PCR扩增过程中出现偏差,导致部分序列过度扩增或者未扩增。

    优化PCR反应条件,包括温度、引物浓度、循环数等参数的调整;使用高质量的DNA模板和合适的PCR酶;进行优化的扩增条件和循环程序,避免引起扩增偏差。

  • 基因序列中存在变异或突变,影响测序结果的准确性和可靠性。

    进行序列比对和分析,识别和区分真实变异和突变以及测序错误;进行验证实验,如重复测序、使用不同的测序平台或方法,确认变异和突变的准确性;对序列结果进行修正和校正,确保测序结果的准确性和可靠性。

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