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纳米抗体昆虫细胞表达

一．杆状病毒表达载体的重组与筛选

杆状病毒的基因组庞大，外源基因的克隆不能通过酶切连接的方式直接插入，必须通过转移载体的介导，构建了一种新杆状病毒穿梭载体Bacmid。该载体可像质粒一样在大肠杆菌中生长，又对鳞翅目昆虫细胞具有感染性。Bacmid含有F因子复制子（可在大肠杆菌中复制）、卡那霉素抗性基因及Tn7转座位点attTn7。转移载体中，外源基因置于杆状病毒启动子之下，两端分别为Tn7的左右端。以其转化含Bacmid的E coli菌株，由辅助质粒提供反式作用发生转座，而将外源基因转到Bacmid的attTn7位置。这种重组了外源基因的Bacmid转染的昆虫细胞，可得到100%阳性重组病毒。

二．纳米抗体

骆驼单域抗体（sabs、VHHs或Nanobodies）是仅由重链可变结构域组成的抗体片段。这些VHHs具有独特的结构和功能特征，因为它们体积小，具有热稳定性和高溶解度。与传统抗体相比，VHHs可以在微生物中制造，大大节省了成本、劳动力和时间，因为VHHs缺乏含有N-连接低聚糖的Fc结构域。到目前为止，VHHs已经在几种生产系统中表达，从原核细胞、酵母、真菌、昆虫细胞、哺乳动物细胞系到植物。

不同形式的抗体-泰克生物.png

图1 不同形式的抗体

三．纳米抗体昆虫细胞表达

与传统的昆虫细胞发酵相比，用杆状病毒转染的昆虫幼虫不仅获得了更高的产量和生物安全标准，而且还降低了生产成本并简化了工艺流程。Lidoptera昆虫，如Trichoplusia ni和Podopterafrugiperda是异源蛋白质表达的常见宿主。该系统还展示了N-聚糖相关的应用微生物生物技术，药物糖蛋白表达问题；然而，通过使用特定的昆虫细胞系或含有甘糖基转移酶的细胞，可以产生哺乳动物类型的N-聚糖。

Gómez-Sebastián等人首次使用改良杆状病毒表达系统（IBES技术）表达VHHs。用不同的重组杆状病毒接种物注射尼罗毛滴虫，从昆虫幼虫中获得的VHHs产量为257mg/L，纯化后可回收50%。表达情况如下所示：

Host	Expression vector	VHH format	Antigen	Production system	Yield
Trichoplusia nilarvae	Baculoviruses	VHH	Rotavirus	Larvae	257mg/L

泰克生物采用M13噬菌体的pIII蛋白进行VHH抗体（纳米抗体）表面展示。我们的科学家构建了带有Flag和6*His tag双标签的噬菌体载体，同时制备出了具有10^8转染效率的TG1和XL1-Blue宿主菌感受态，经过2-3次转染与扩增，能够为客户提供有效库容量为10^8-10^9，且包装库容为10^13-10^16/ml颗粒数的高质量VHH抗体展示文库。

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