抗体亲和力成熟服务-泰克生物-酵母展示服务专家

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抗体亲和力成熟服务

泰克生物专注于为客户开发高质量的靶向性药物抗体。经过多年的技术积累，形成了一套高效的抗体亲和力成熟策略。

█ 抗体亲和力成熟服务

用于治疗性的抗体，对于亲和力的要求一般比较高，尤其是异种来源的抗体经过人源化后有可能降低跟抗原的结合能力。因此当抗体药物的亲和力不能满足其后期开发需求时就需要通过体外亲和力成熟实验进行优化，从获得更好的亲和力序列。抗体亲和力提升需要行之有效的解决方法，泰克生物经过10多年技术积累，搭建了一套高效的抗体亲和力成熟改造策略，以帮助客户对母本序列获得需要大限度亲和力提升且尽可能少的CDR区域突变：FR以及CDR突变位点氨基酸的确定，构建高质量的突变文库以及有效的筛选方式，三者缺一不可。

泰克生物基于表面展示体系，以母本抗体序列在酵母或噬菌体表面展示的亲和力为基线，通过半导体芯片法和Trimer Codon方式合成经过MOE系统设计的抗体序列突变体，以保证为客户筛选到复合目标要求的候选抗体序列。

抗体亲和力成熟发现服务-泰克生物.png

图1基于表面技术平台的抗体亲和力成熟发现服务

█ 抗体亲和力成熟表面展示服务类型

抗体亲和力的提升倍数跟母本抗体起始抗体亲和力有很大的关系，起始亲和力越低，亲和力提升效应越明显。母本抗体在进行亲和力过程中，对于经过MOE系统确定的待突变氨基酸位点个数，直接直接决定了需要构建的文库类型。当母本抗体序列突变的序列条数<10^7时，采用酵母展示体系优势会比较明显，经过facs筛选时直接获得高亲和力群体；反之，当母本抗体序列突变的序列>10^7时，噬菌体展示技术的体系优势会比较明显。泰克生物采用的抗体突变序列基因合成方式为Trimer codon方式或半导体合成方式（视突变序列条数决定），可以避免NNK/NNM方式合成基因武库时带来的密码子偏移、移码突变和终止密码子掺入等问题，更重要的是前者合成的突变文库覆盖度高，均一性好（19种氨基酸分布概率相同）。泰克生物的专家会根据客户提供的信息制定客户专属的抗体亲和力优化方案，以保障客户项目的成功率。

CAR-T/CAR-NK治疗性的驼源VHH抗体（又被称为纳米抗体）噬菌体展示发现路径如图1所示。

█ 抗体亲和力成熟服务内容和周期

内容	交付	周期
Step1:抗体3D建模确定热点突变氨基酸	1) 亲和力成熟抗体的 1-3 个，其中一个抗体至少5倍以上亲和力提升（视具体亲本序列确定）； 2) 对应的重组抗体蛋白1mg 3) 完整分析报告 (PDF)	14-18周
Step 2: FR和 CDRs 组合突变基因库合成文库构建与筛选
Step3:抗体生产与验证交付

泰克生物还可以为客户进行初步成药性评价，抗体人源化、CAR-T/CAR-NK先导序列设计及细胞杀伤验证等一站式技术服务，为客户的科研项目及药物抗体开发助力。

█ 抗体亲和力成熟平台服务优势

完全定制化的展示体系可供选择

成熟的亲和力改造平台，确保高质量的

亲和力成熟服务

可视化的抗体3D建模热点突变技术

保证型的高质量服务

抗体亲和力成熟服务常见问题解答

什么是抗体亲和力？

答：现在来看，如果想要成功研发出一个具有治疗作用的mAb，我们需要这个单克隆抗体的抗体序列人源化以及抗体的亲和力成熟。由于抗体表面的序列容易发生变异，所以对抗体来说，如何提高对多种抗原的亲和力仍未解决。在临床中，研究人员常常有如果增强抗体的亲和力就有可能会引起机体产生更高的生物活性，这样会正反馈减少给药的注射剂量，同时也减弱可能会出现的相关副作用，最终减少了制药成本这种想法。工业治疗性抗体避免了进一步体外亲和力成熟的需要，从而缩短了泰克生物实验室中抗体开发的时间轴。mAb 对靶抗原的本能结合能力具有极强的特异性和亲和力，这推动了 mAb 在诊断和治疗领域发挥作用
当我们在抗体亲和力成熟服务中遇到抗体的突变效率低、筛选难度大等问题时，我们怎样处理？

答：当我们在抗体亲和力成熟过程中引入突变，但是引入的突变没有使我们的抗体亲和力有一个明显的提升。造成这种现象的愿意可能是我们使用的突变的方法不恰当、突变的区域选择不合适或在抗体亲和力突变过程中突变的频率太低。虽然从大量突变抗体中选出亲和力最高的抗体是一个难度巨大的挑战，整个筛选的过程我们可能会受到多个因素的干扰，比如我们筛选中所使用的方法是否灵敏、是否是特异的以及我们进行实验的环境是否具有稳定性。泰克生物针对上述问题，进行了突变策略的优化，我们利用多突变方法互相结合的方式进行抗体突变。我们还可以利用抗体和抗原识别的结构位点，对有大量突变区域的位点进行。同时使用一些高质量的产品，比如聚合酶进行高频率突变。在筛选过程中，泰克生物通过使用高通量的筛选技术，比如是流式细胞术、表面展示技术等进行大范围筛选，这样既提高筛选效率，又提高了高亲和力抗体的筛选速度和准确性。泰克生物通过建立一个标准的筛选体系和实验流程，来减少实验中可能出现的误差，进行体外亲和力筛选，保证重组抗体亲和力成熟，助力于客户抗体药物发现。
当我们在抗体亲和力成熟服务中遇到抗体稳定性不高、实验重复性差等问题时，我们怎样处理？

答：当我们在抗体亲和力成熟过程中发现抗体稳定性不高，这可能是因为我们在提高抗体亲和力的同时，需要牺牲抗体原本的稳定性或特异性。也有可能是某些突变造成的抗体结构的改变最终导致抗体稳定性不强，从而对抗体的整体性能产生影响。在抗体亲和力实验中，如果发现实验的重复性差，实验的结果也在不同批次或不同实验室之间出现比较大的差异。泰克生物在进行突变时，我们对抗体的亲和力和稳定性进行了整体的考虑，这样可以防止过度优化导致抗体性能下降。同时，我们对经过多重实验筛选出的抗体进行验证和测定，确保抗体在客户后续应用中的稳定性和高亲和力。泰克生物为了确保实验的可重复性，我们通过严格控制实验条件实验操作等，从各个方面去减少实验误差，我们建立完善的实验记录和档案管理制度，能够保证我们实验数据的真实性和可验证性。
抗体体外亲和力成熟技术的突变策略有哪些？

答：抗体体外亲和力成熟技术的突变策略主要分为三大类：诱导性随机突变、链置换和定向突变。易错PCR是一种成熟的通用随机诱变方法，它利用了低保真DNA聚合酶（即Taq聚合酶）的自然错误率。mAb 鉴定的工作流程遵循传统的平移策略。选择理想的 mAb 克隆进行亲和成熟后，然后进行易错 PCR 扩增，在 CDR 处引入突变，从而生成微型突变文库。通过操纵 DNA 扩增条件，由于聚合酶的性质缺乏 3′-5′校对能力，因此可以产生理想的错配。基因修饰和多样化可以通过链置换来实现，以获得超出自然可得的突变组合。链置换提供了一种“混搭”机制，使一条链（重链或轻链）的库与伙伴链配对（这条链保持不变），从而产生第二个库。这种结构域改组能够模拟体内 SHM，从而通过交换的可变结构域的普遍效应提高亲和力。定向突变是一种体外基因修饰方法，涉及确定的基因位点或 DNA 序列的特定区域，以在序列、结构和功能水平上研究候选基因。为了进行位点特异性诱变，需要结构数据，这些数据可以从以前的随机诱变研究中得出，其中确定了重要的突变和可调位置。
抗体亲和力成熟的原理是什么？

答：抗体亲和力成熟是一个十分复杂需要多个方面共同协作的生理过程，当机体遇到病原入侵时，我们的免疫系统的B淋巴细胞立刻开始工作，经过一系列的信号之后，我们的抗体亲和力成熟。在B细胞成熟的过程中，B细胞经过了体细胞的高频突变，生成了丰富的抗体克隆群，同时B细胞还被外界抗原通过滤泡树突细胞介导的过程所激活。这些机制共同作用，显著提升了B细胞后代及其生成抗体的平均抗原结合力，从而实现了体内抗体亲和力的自然优化，满足了人体的需求。面对抗原刺激时，B细胞能够借助基因重排，创造出抗体的结构变异体。之后，CDRs产生高频突变，这些突变使得抗体能够更加准确的和抗原识别。

什么是抗体亲和力？

答：现在来看，如果想要成功研发出一个具有治疗作用的mAb，我们需要这个单克隆抗体的抗体序列人源化以及抗体的亲和力成熟。由于抗体表面的序列容易发生变异，所以对抗体来说，如何提高对多种抗原的亲和力仍未解决。在临床中，研究人员常常有如果增强抗体的亲和力就有可能会引起机体产生更高的生物活性，这样会正反馈减少给药的注射剂量，同时也减弱可能会出现的相关副作用，最终减少了制药成本这种想法。工业治疗性抗体避免了进一步体外亲和力成熟的需要，从而缩短了泰克生物实验室中抗体开发的时间轴。mAb 对靶抗原的本能结合能力具有极强的特异性和亲和力，这推动了 mAb 在诊断和治疗领域发挥作用
当我们在抗体亲和力成熟服务中遇到抗体的突变效率低、筛选难度大等问题时，我们怎样处理？

答：当我们在抗体亲和力成熟过程中引入突变，但是引入的突变没有使我们的抗体亲和力有一个明显的提升。造成这种现象的愿意可能是我们使用的突变的方法不恰当、突变的区域选择不合适或在抗体亲和力突变过程中突变的频率太低。虽然从大量突变抗体中选出亲和力最高的抗体是一个难度巨大的挑战，整个筛选的过程我们可能会受到多个因素的干扰，比如我们筛选中所使用的方法是否灵敏、是否是特异的以及我们进行实验的环境是否具有稳定性。泰克生物针对上述问题，进行了突变策略的优化，我们利用多突变方法互相结合的方式进行抗体突变。我们还可以利用抗体和抗原识别的结构位点，对有大量突变区域的位点进行。同时使用一些高质量的产品，比如聚合酶进行高频率突变。在筛选过程中，泰克生物通过使用高通量的筛选技术，比如是流式细胞术、表面展示技术等进行大范围筛选，这样既提高筛选效率，又提高了高亲和力抗体的筛选速度和准确性。泰克生物通过建立一个标准的筛选体系和实验流程，来减少实验中可能出现的误差，进行体外亲和力筛选，保证重组抗体亲和力成熟，助力于客户抗体药物发现。
当我们在抗体亲和力成熟服务中遇到抗体稳定性不高、实验重复性差等问题时，我们怎样处理？

答：当我们在抗体亲和力成熟过程中发现抗体稳定性不高，这可能是因为我们在提高抗体亲和力的同时，需要牺牲抗体原本的稳定性或特异性。也有可能是某些突变造成的抗体结构的改变最终导致抗体稳定性不强，从而对抗体的整体性能产生影响。在抗体亲和力实验中，如果发现实验的重复性差，实验的结果也在不同批次或不同实验室之间出现比较大的差异。泰克生物在进行突变时，我们对抗体的亲和力和稳定性进行了整体的考虑，这样可以防止过度优化导致抗体性能下降。同时，我们对经过多重实验筛选出的抗体进行验证和测定，确保抗体在客户后续应用中的稳定性和高亲和力。泰克生物为了确保实验的可重复性，我们通过严格控制实验条件实验操作等，从各个方面去减少实验误差，我们建立完善的实验记录和档案管理制度，能够保证我们实验数据的真实性和可验证性。
抗体体外亲和力成熟技术的突变策略有哪些？

答：抗体体外亲和力成熟技术的突变策略主要分为三大类：诱导性随机突变、链置换和定向突变。易错PCR是一种成熟的通用随机诱变方法，它利用了低保真DNA聚合酶（即Taq聚合酶）的自然错误率。mAb 鉴定的工作流程遵循传统的平移策略。选择理想的 mAb 克隆进行亲和成熟后，然后进行易错 PCR 扩增，在 CDR 处引入突变，从而生成微型突变文库。通过操纵 DNA 扩增条件，由于聚合酶的性质缺乏 3′-5′校对能力，因此可以产生理想的错配。基因修饰和多样化可以通过链置换来实现，以获得超出自然可得的突变组合。链置换提供了一种“混搭”机制，使一条链（重链或轻链）的库与伙伴链配对（这条链保持不变），从而产生第二个库。这种结构域改组能够模拟体内 SHM，从而通过交换的可变结构域的普遍效应提高亲和力。定向突变是一种体外基因修饰方法，涉及确定的基因位点或 DNA 序列的特定区域，以在序列、结构和功能水平上研究候选基因。为了进行位点特异性诱变，需要结构数据，这些数据可以从以前的随机诱变研究中得出，其中确定了重要的突变和可调位置。
抗体亲和力成熟的原理是什么？

答：抗体亲和力成熟是一个十分复杂需要多个方面共同协作的生理过程，当机体遇到病原入侵时，我们的免疫系统的B淋巴细胞立刻开始工作，经过一系列的信号之后，我们的抗体亲和力成熟。在B细胞成熟的过程中，B细胞经过了体细胞的高频突变，生成了丰富的抗体克隆群，同时B细胞还被外界抗原通过滤泡树突细胞介导的过程所激活。这些机制共同作用，显著提升了B细胞后代及其生成抗体的平均抗原结合力，从而实现了体内抗体亲和力的自然优化，满足了人体的需求。面对抗原刺激时，B细胞能够借助基因重排，创造出抗体的结构变异体。之后，CDRs产生高频突变，这些突变使得抗体能够更加准确的和抗原识别。

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