抗体亲和力检测（SPR）-检测服务专题-泰克生物-酵母展示服务专家

抗体亲和力检测（SPR）

生物活性化合物的检测是分子生物学和生物化学领域的重要课题之一。其中一种最有前途的检测方法是利用表面等离子体共振技术对生物活性化合物进行无标记检测。这种方法允许实时监视结合情况，而无需标记。因此，该系统可用于确定各种类型分子之间相互作用的亲和力和速率常数。单克隆抗体（MoAbs）是检查生物分子结构和功能的强大工具。对MoAbs定义的表位的分布和结构特征的了解可以用来识别参与生物活动的区域。

一．抗体亲和力检测的基本原理

表面等离子体共振是平面偏振光在全内反射条件下撞击金属薄膜时发生的物理过程。通常，产生SPR的表面由沉积在玻璃上的50nm厚的金属层组成。由于SPR效应只能发生在薄金属层上，其中电子表现为自由电子气体，这意味着它们的运动与运动时留下的电荷无关，因此金属的选择仅限于铜、银、铝和金。

用于SPR测量的底物和通过自组装的单分子固定化生物活性分子。SPR通过测量反射光的强度来检测。在总内反射角处，测得反射光强度急剧下降。SPR角的位置取决于靠近传感表面的物质的折射率。传感器表面附近的折射率由于大分子与表面的结合而发生变化。因此，总内反射角将根据结合大分子的数量而变化。束缚物质的数量与总内反射角的位移之间存在线性关系。

通过将含水缓冲溶液中的分析物注入流动池，诱导其流过传感器表面。分析物与附着在金属表面的配体的相互作用引起金属表面和表面等离子体场的变化。测量入射光谐振波长的位移。光线穿过棱镜并滑动，从黄金反射，并通过棱镜返回到检测器。光学响应的高灵敏度是由于在金表面附近有一个非常有效的传导电子的集体激发。由于SPR检测与被分析样品的化学性质无关，原则上，所有类型的分子（如蛋白质、脂质、核酸）和小分子（如药物、底物和辅因子）都可用于监测生物分子间的相互作用。

在SPR生物传感实验中，用缓冲液彻底清洗含固定配体的整个金表面。在稳定基线出现后，引入含有分析物的溶液（结合阶段）。分析物与附着在表面的配体的相互作用导致信号的增加。在分析物注射结束时，样品被连续流动的缓冲液所取代，信号的减少现在反映了分析物与表面结合复合物的解离。然后用特定的再生试剂再生表面，在缓冲液存在的情况下，信号返回到稳定的基线。

由于固定化生物活性材料与被分析物之间的相互作用非常特殊，没有其他生物材料能够与固定化生物活性分子形成配合物并显著影响SPR生物传感器的分析信号。反射光的反射角的偏移被解释为分析信号。该信号与形成亲和络合物的分析物的浓度成正比。因此，通过监测最小反射角的位移，可以很容易地观察和量化存在于溶液中的分析物与固定化配体之间的亲和复合物的形成程度。

SPR的优点之一是该方法允许人们实时研究生物分子的相互作用。也不需要任何标记（例如放射性或荧光），这除了节省时间外，还有助于保存生物分子的原生性。SPR生物传感器已被用于研究广泛的生物分子相互作用，提供定性（鉴定、位点特异性、表位定位）和定量（动力学、亲和力和浓度分析）信息。

二．抗体亲和力检测服务案例

某蛋白与小分子的相互作用的传感图-泰克生物.png

图1 某蛋白与小分子的相互作用的传感图

泰克生物基于Octet和Biacore等平台为客户提供准确、快速的亲和力测定服务，根据客户需求提供各具特色的分子间相互作用分析服务，包括但不限于业内常用的检测技术：表面等离振子共振（Surface plasmon resonance, SPR）和生物膜干涉技术（Bio-Layer Interferometry, BLI），保证检测结果准确、客观、可信。我们着力于为客户提供高品质的一站式技术服务，满足不同客户的实验需求。