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酶酵母展示服务

泰克生物致力于为客户提供高质量的酶酵母展示服务,为客户的后续的酶活性验证、功能酶的筛选(流式筛选)、高活性酶的开发以及蛋白酶的体外定向进化等下游研发工作提供有力支持。泰克生物在酶酵母展示方面拥有多年的项目开发经验和心得,能够为客户提供各种定制化的酶酵母展示服务,包括但不限于单个酶展示、trimer codon突变酶文库展示、NNK突变酶文库展示、error-prone PCR突变酶文库展示等多种酶酵母展示服务。

酵母展示技术(Yeast Display Technology)是指将酶序列/酶突变文库序列与凝集素Aga2p融合表达,Aga2p蛋白亚基通过两个二硫键与固定在酵母细胞壁上的Aga1p 蛋白亚基结合(即载体蛋白将蛋白酶(带有特定标签)以活性形式锚定于酵母细胞外表面),结合流式分选技术,将诱导表达出目标酶蛋白的酵母菌株筛选出来。酵母展示技术使目标蛋白酶固定在酵母表面而更加稳定,且蛋白酶接近天然的空间构象,可用ELISA、流式等方法进行验证。基于酵母展示技术,泰克生物能够为客户提供高质量的酶突变文库酵母展示服务,且酵母文库库容可达10^7-10^8,文库多样性、插入率、阳性率均可达90%以上,满足各类客户对于酶酵母展示文库的质量要求。同时,泰克生物还能提供酶酵母展示配套的下游流式验证、ELISA验证、流式分选等一站式技术服务,客户只需要提供具体的酶序列信息以及需要突变的位点(连续突变或者不连续点突变等),泰克生物的科学家均能够根据客户的需求进行合理的方案设计和个性化定制,为客户的科研项目及高活性酶的开发助力。

 

█ 酶酵母展示文库构建服务

 

泰克生物建立了完善的酵母展示体系,能够提供各种高质量的定制化的酵母展示服务,包括但不限于VHH抗体酵母展示、VHH抗体CDR区域突变文库酵母展示、scFv抗体酵母展示、蛋白酵母展示、酶酵母展示、酶突变文库酵母展示等,满足不同客户的科研需求。酶基因随机突变文库酵母展示服务流程如图1所示。

酶酵母展示文库构建-泰克生物.jpg 

图1酶基因随机突变文库酵母展示服务流程

 

█ 服务内容和周期

 

步骤

服务内容

周期

单个酶酵母展示

(1) 蛋白酶基因合成+PCR扩增目的基因;

(2) 载体构建与转化:蛋白酶基因拼接酵母展示载体,电击转化酵母菌株;

(3) 菌株PCR验证;

(4) 交付:展示酵母菌株以及诱导培养物,标准实验报告

4-5周

酶突变文库酵母展示

1) 采用trimer codon技术/NNK技术/error-prone PCR技术构建gene pool

2) 构建酵母载体gene pool

3) 载体构建与转化:电击转化酵母菌株;

4) 随机挑单克隆进行菌株PCR验证+文库NGS测序验证;

5) 交付:文库2-3ml,库容>10^8

4-6周

 

█ 服务优势


 

-- 多种随机突变方式可选:trimer codon技术、NNK技术、error-prone PCR技术等

-- 多种酶展示可选:可展示单独酶蛋白,可展示酶突变文库(包括单不限于trimer codon突变文库、NNK突变文库、error-prone PCR突变文库)

-- 酶酵母展示技术成熟:酶突变文库库容可达10^7-10^8,插入率均满足>90%

-- 高标准交付:文库质量保证,为客户的下游实验提供有力支持

-- 实验记录可追溯:文库QC质控标准,中英文实验报告,原始实验记录

-- 可提供一系列配套的下游实验服务,流式验证验证、文库筛选等

-- 一对一个性化方案定制,根据客户需求设计最佳的构建方案(如:突变文库设计、标签设计、载体构建设计、验证方案设计等),满足各类客户的科研项目需求

-- 一站式服务:从方案设计、基因/基因库合成、载体构建、菌株转化、诱导表达、流式验证到文库筛选等一站式技术服务


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酶酵母展示服务常见问题解答

  • 酶可能未能正确定位到酵母细胞的目标位置,影响其功能表达。

    优化信号肽序列,确保酶能够正确定位到细胞器或细胞膜上,以实现其功能表达。

  • 酶在酵母细胞内可能无法正确折叠或组装,导致其结构异常。

    选择适当的信号肽和表达宿主,优化培养条件以促进酶的正确折叠和组装;采用分子筛选技术或蛋白工程方法对酶进行改造,提高其稳定性和活性。

  • 酶在酵母中的表达水平较低,影响酶活性和产量。

    优化启动子和信号肽序列、调整培养条件(如温度、pH、培养基成分等)、选择适当的酵母菌株和表达载体,以提高酶的表达水平和活性。

立即咨询酶酵母展示服务

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