细胞核酸适配体筛选服务-泰克生物-酵母展示服务专家

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细胞核酸适配体筛选服务

泰克生物致力于为客户提供高亲和力、高特异性的核酸适配体筛选技术服务，如蛋白、多肽、氨基酸、小分子物质、细胞和细菌、金属离子等靶标的特异性适配体筛选服务。

█ 细胞核酸适配体筛选服务

核酸适配体筛选是指基于指数富集的配体系统进化技术（Systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX）原理，通过靶分子与核酸适配体文库的孵育、清洗和扩增，从核酸适配体文库中得到的目的寡核苷酸片段（DNA片段或RNA片段）。核酸适配体作为一种功能核酸，具有诸多优点，基于其高特异性，来精确锁定靶标分子，有效避免非特异性结合的干扰。通过SELEX技术，可以迅速且大量地合成适配体，无需繁琐的生物制备流程。核酸适配体能在多种环境条件下保持其结构与功能的完整性，同时拥有更高的热稳定性和较低的免疫原性。此外，由于其分子量相对较小，细胞特异性适配体筛选出的适配体更易穿透细胞和组织屏障，迅速抵达作用位点。细胞作为筛选靶标，由于其表面布满各种蛋白和分子，理论上筛选获得的核酸适配体可以结合到该靶细胞上的任意位点上，通过这种方法筛选获得适配体一般缺乏良好的特异性。因此我们在筛选的过程中，需要客户配合我们提供高质量的负筛细胞，以此可以避免非细胞特异靶向性的适配体被筛选出来。

SELEX技术的核心在于体外化学合成一个单链寡核苷酸库，并通过反复的筛选与扩增步骤，最终获得与靶标物质高度亲和的核酸适配体。而Cell-SELEX则专注于细胞、细菌等靶标物质的筛选，利用离心、沉淀等手段有效分离并去除未结合的适配体，从而开展细胞特异性适配体筛选，把正向筛选和不表达靶蛋白的细胞的负向筛选相互交替，最终获得适配体，其具体流程见图1。

细胞核酸适配体筛选服务-泰克生物1.png

图1 基于SELEX技术的细胞特异性适配体筛选服务流程

泰克生物所提供的针对多种类型样品的核酸适配体服务基于指数富集的配体系统进化技术（SELEX筛选技术），去筛选获得相应的DNA或RNA序列，通过多种筛选方法（包括Cell-SELEX、液相SELEX等）来满足不同样本的筛选要求。与此同时，泰克生物的适配体文库库容量达10^13-10^14，在通过8-10轮筛选富集后，能够确保获得针对靶标物质的适配体（结合亲和力可达nM- pM级别），与常规适配体筛选相比，有更大的优势。泰克生物的科研团队为客户后续的适配体功能验证（包括亲和力验证、竞争ELISA验证、体外靶向细胞功能性验证（例如：核酸适配体的体外识别和抑制功能验证、体外流式阻断功能等）、体内功能验证（例如：适配体的体内靶向抑制功能验证、信号通路阻断功能验证等）打好基础，对客户后续针对靶向分子药物开发等科研工作提供支持。

█ 细胞核酸适配体筛选服务内容和周期

筛选针对细胞的核酸适配体，类似于筛选针对细胞的靶向肽筛选，两者均需要高质量的正筛细胞和负筛对照细胞。这两种筛选靶向序列的方法，非常适合于动物模型来源的原代细胞的筛选工作，这也是泰克生物多年的经验积累。大体的筛选服务阶段如下所示：

步骤

服务内容

周期

Step1：

核酸适配体筛选

(1) 客户提供正筛和负筛细胞；

(1) 适配体文库筛选与富集：PCR扩增富集+转录+跑胶回收，一般为6-10轮；

(2) 筛选产物进行NGS测序；

(2) 交付：适配体序列 5-15 条，实验报告，原始数据（包括NGS测序原始数据、胶图）；

10-15周

Step2：

适配体合成和流式验证（可选）

(1) 客户提供细胞；

(2) 根据序列进行适配体合成；

(3) 适配体与细胞进行流式验证；

(3) 交付：实验报告，原始数据；

4-5周

█ 细胞核酸适配体筛选服务优势

多种筛选靶点可选：蛋

白、多肽、氨基酸、小

分子等

文库库容大，项目成功率高

SELEX技术平台成熟：筛

选获得的核酸适配体亲

和力可达nM-pM级别

配套的下游验证实验丰

富：亲和力验证（包括

BLI和SPR亲和力验证）、

竞争ELISA验证、流式

阻断验证等

实验记录可追溯：中英文实验

报告，原始实验记录

一对一个性化方案定制，

满足各类客户的科研项目

需求

细胞核酸适配体筛选服务常见问题解答

什么是细胞核酸适配体筛选服务，有什么优点？

答：适配子，包括 RNA适配子和DNA 适配子，通过高特异性和亲和力与多种靶标结合。适配子是通过一种新的细胞选择过程（cell-SELEX）选择的，其中整个完整细胞用作靶标，而另一种相关细胞系用作阴性对照。cell-SELEX 能够生成多个适配体用于靶细胞的分子识别，并且在发现所选适配体的细胞表面结合分子方面具有显著优势。参与细胞表面靶标的能力也使该领域进入了靶向递送治疗剂的领域，因为核酸与小分子药物、蛋白质毒素、脂质体或其他纳米颗粒的偶联相对简单。它作用于天然结构中的蛋白质，其中细胞膜上保守的生物特性不受蛋白质纯化程序的影响。此外，不需要事先了解某些其他蛋白。泰克生物出来可以提供细胞核酸适配体筛选服务外，还可以提供蛋白定制和以及噬菌体展示服务。
DNA适配体和RNA适配体血清稳定性的比较？我们如何提高适配体稳定性？

答：血清稳定性一直是基于核酸的分子应用的一个问题。因此，科学家比较了基于 RNA和DNA的适配体的稳定性。结果表明DNA适配体的血清稳定性远优于RNA适配体。RNA适配体成本高且血清稳定性差，体内使用我们选择DNA适配体。未修饰的RNA在血浆中被清除只需要几秒，而 DNA 被清除需要半小时到一小时。RNA适配体在与大鼠和人血清孵育后迅速降解。相比之下，DNA 适配体在人和大鼠血清中分别稳定60 和30分钟。因此，如果需要高的血清稳定性，大部分研究人员选择DNA适配体，虽然RNA适配体往往展现出相较于其对应的DNA适配体更高的结合力，但科学家仍不懈努力，研发了多种化学改良手段，旨在增适配体在血清中的稳定性。
在实验过程中，我们如何保证筛选出的适配体的特异性？如何确保开发适配子能发挥需要的作用？

答：我们通常结合使用细胞分析、siRNA 敲低和工程细胞系来进一步验证靶标的特异性。我们可以通过标准化流程筛选出具有高特异性的适配体。还可以通过阴性或敲除细胞系进行，并得到体外结合实验的支持。根据泰克生物自己的经验，我们建议使用流式细胞术来测试和验证细胞上的适配子功能，与上述基于大量细胞的检测不同，流式细胞术允许单独询问细胞群中的每个细胞，从而查看观察到的染色是针对样品中的所有细胞还是细胞亚群。此外，有许多经过充分验证的荧光标记抗体可用作对照，它可以验证靶标，还可以比较染色能力。
什么是适配体内化？如何帮助细胞核酸适配体进行内化？

答：适配子来源于称为 SELEX的迭代过程。适配子具有高亲和力、优异的特异性和低毒性。此外，它们稳定且易于合成、修改和操作。尽管适配子在体外非常有效，但大多数适配子在没有外部帮助的情况下不能被细胞直接吸收。截至目前，仅有极少数适配子能够成功被细胞摄取。这些事实都表明了内化能力在体内的应用比较困难。为了提升这一能力，我们采用各种手段去优化条件，诸如采用单核苷酸拼接后组装等前沿技术。也可以对其进行改造，如添加氟、氨基等基团，可以改变其理化性质，提高稳定性，促进适配体与细胞膜的相互作用，帮助适配体内化。
整个服务流程中，我们有注意什么因素？如何提高筛选得的亲和力？

答：一致的细胞培养维持对于 Cell-SELEX 的成功至关重要，例如在所有选择周期、传代次数和生长条件下保持一致的汇合度。细胞生长时间延长或培养条件差会影响状态和表达，因此会导致效率降低。此外，为了消除寡核苷酸的非特异性结合，重要的是在与随机寡核苷酸文库孵育之前用 tRNA、鲑鱼精子DNA 或多聚封闭靶细胞。需要注意的是，胰蛋白酶处理会剥离细胞表面标志物，因此需要通过与培养基孵育至少2小时来回收细胞。此外，如果使用贴壁细胞作为适配体发育的细胞悬液，则应轻轻摇动以防止发生粘附。整个过程在4-37℃的范围内进行，增加选择温度和延长时间会增加适配体内化到细胞中的可能性。

什么是细胞核酸适配体筛选服务，有什么优点？

答：适配子，包括 RNA适配子和DNA 适配子，通过高特异性和亲和力与多种靶标结合。适配子是通过一种新的细胞选择过程（cell-SELEX）选择的，其中整个完整细胞用作靶标，而另一种相关细胞系用作阴性对照。cell-SELEX 能够生成多个适配体用于靶细胞的分子识别，并且在发现所选适配体的细胞表面结合分子方面具有显著优势。参与细胞表面靶标的能力也使该领域进入了靶向递送治疗剂的领域，因为核酸与小分子药物、蛋白质毒素、脂质体或其他纳米颗粒的偶联相对简单。它作用于天然结构中的蛋白质，其中细胞膜上保守的生物特性不受蛋白质纯化程序的影响。此外，不需要事先了解某些其他蛋白。泰克生物出来可以提供细胞核酸适配体筛选服务外，还可以提供蛋白定制和以及噬菌体展示服务。
DNA适配体和RNA适配体血清稳定性的比较？我们如何提高适配体稳定性？

答：血清稳定性一直是基于核酸的分子应用的一个问题。因此，科学家比较了基于 RNA和DNA的适配体的稳定性。结果表明DNA适配体的血清稳定性远优于RNA适配体。RNA适配体成本高且血清稳定性差，体内使用我们选择DNA适配体。未修饰的RNA在血浆中被清除只需要几秒，而 DNA 被清除需要半小时到一小时。RNA适配体在与大鼠和人血清孵育后迅速降解。相比之下，DNA 适配体在人和大鼠血清中分别稳定60 和30分钟。因此，如果需要高的血清稳定性，大部分研究人员选择DNA适配体，虽然RNA适配体往往展现出相较于其对应的DNA适配体更高的结合力，但科学家仍不懈努力，研发了多种化学改良手段，旨在增适配体在血清中的稳定性。
在实验过程中，我们如何保证筛选出的适配体的特异性？如何确保开发适配子能发挥需要的作用？

答：我们通常结合使用细胞分析、siRNA 敲低和工程细胞系来进一步验证靶标的特异性。我们可以通过标准化流程筛选出具有高特异性的适配体。还可以通过阴性或敲除细胞系进行，并得到体外结合实验的支持。根据泰克生物自己的经验，我们建议使用流式细胞术来测试和验证细胞上的适配子功能，与上述基于大量细胞的检测不同，流式细胞术允许单独询问细胞群中的每个细胞，从而查看观察到的染色是针对样品中的所有细胞还是细胞亚群。此外，有许多经过充分验证的荧光标记抗体可用作对照，它可以验证靶标，还可以比较染色能力。
什么是适配体内化？如何帮助细胞核酸适配体进行内化？

答：适配子来源于称为 SELEX的迭代过程。适配子具有高亲和力、优异的特异性和低毒性。此外，它们稳定且易于合成、修改和操作。尽管适配子在体外非常有效，但大多数适配子在没有外部帮助的情况下不能被细胞直接吸收。截至目前，仅有极少数适配子能够成功被细胞摄取。这些事实都表明了内化能力在体内的应用比较困难。为了提升这一能力，我们采用各种手段去优化条件，诸如采用单核苷酸拼接后组装等前沿技术。也可以对其进行改造，如添加氟、氨基等基团，可以改变其理化性质，提高稳定性，促进适配体与细胞膜的相互作用，帮助适配体内化。
整个服务流程中，我们有注意什么因素？如何提高筛选得的亲和力？

答：一致的细胞培养维持对于 Cell-SELEX 的成功至关重要，例如在所有选择周期、传代次数和生长条件下保持一致的汇合度。细胞生长时间延长或培养条件差会影响状态和表达，因此会导致效率降低。此外，为了消除寡核苷酸的非特异性结合，重要的是在与随机寡核苷酸文库孵育之前用 tRNA、鲑鱼精子DNA 或多聚封闭靶细胞。需要注意的是，胰蛋白酶处理会剥离细胞表面标志物，因此需要通过与培养基孵育至少2小时来回收细胞。此外，如果使用贴壁细胞作为适配体发育的细胞悬液，则应轻轻摇动以防止发生粘附。整个过程在4-37℃的范围内进行，增加选择温度和延长时间会增加适配体内化到细胞中的可能性。

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