纳米抗体的细胞系免疫原-纳米抗体专题-泰克生物-酵母展示服务专家

纳米抗体的细胞系免疫原

1.纳米抗体的免疫原性

免疫原性与分子量及化学结构等有关，分子量越小免疫原性越小。由于纳米抗体的分子量只有常规抗体的1/10，只有一个结构域，因此刺激机体形成特异性抗体或是引起体液和细胞免疫应答机率大大降低。同时，纳米抗体无Fc段，避免了Fc引起的补体反应，对人体免疫原性很低，与人的生物相容性较好。因此，纳米抗体(Nbs)有利于降低其与传统抗体相比的免疫原性。但是，纳米抗体对人体来说是外来物质，仍有可能引发免疫反应，并且也有研究表明纳米抗体作为药物长期反复使用会增加免疫原性，影响治疗，所以分析纳米抗体的免疫原性至关重要。

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图1：传统的IgG抗体和羊驼纳米抗体结构比较

在抗体制备过程中免疫原分子越大，决定簇的数目越多。活化B细胞种类越多，抗体的种类也会越多。因而免疫原的选择设计是抗体研发的相对最核心环节，决定着免疫制备环节能否产生特异性的抗体，抗体种类的多与少，所得抗体特异性的强与弱，同样影响着后期纯化及验证环节工作的强度。

免疫原的选择有多肽肽段，原核表达全蛋白，真核表达全蛋白，细胞等。结合免疫原分子的特点，抗体的应用可以提供预计识别的表位类型，确定使用哪种类型的免疫原和免疫原的序列。

2.免疫原类型

纳米抗体的免疫原类型包括蛋白质、小分子、多肽、病毒、DNA、RNA和细胞系类型免疫原。结合免疫原分子的特点，抗体的应用可以提供预计识别的表位类型，确定使用哪种类型的免疫原和免疫原的序列。如IHC的实验过程涉及到了对它本身抗原的一个变性的过程，或者说是天然细胞里面靶点的变性过程。所以在设计的时候，倾向于设计成一个线性的表位，如使用多肽这种免疫原的方式，来进行免疫组化抗体的开发。原核/真核重组蛋白抗原因较好抗原性被多数生产采用，在涉及构象结合的实验中，可能会出现未知的非特异结合，增加后续筛选困难。细胞作为免疫原适用于流式抗体的研发和生产。

3.细胞系类型免疫原

实验中当不清楚自己需要的抗原时，比如想制备出肿瘤特异性抗原的抗体的时候，往往需要以组织、全细胞或者细胞组分作为抗原进行动物免疫。

如果以组织作为抗原，则需要切除新鲜的组织，用生理盐水洗干净，然后用滤网和研杵将其分离成单个细胞。如果以全细胞作为免疫原，则需要洗去培养基中的血清，建议直接以完整的细胞作为免疫原而不将其破碎，因为完整的细胞具有更强的颗粒性和外源性。组织来源的细胞和人工培养的细胞作为免疫原时宜用腹腔免疫的途径进行动物免疫，而不建议用皮下免疫。对于细胞组分作为抗原，重点则在细胞组分的分离上面。细胞膜和细胞质的分离可以采用低渗法（只需要配一个低浓度的缓冲液，另外加入MgCl₂可以稳定细胞核使其不破碎），也可以加入Ca²⁺进行匀浆，然后再离心，细胞膜就在下面形成沉淀。细胞内部细胞器的分离则主要依靠密度梯度离心了。有些细胞器的密度相差比较近，因此可能需要更细的密度梯度离心。

有时候也可以采用一些特别的方法进行辅助。线粒体和过氧化酶体沉降系数很接近，用密度梯度离心的方法不容易分开，于是可以在老鼠体内注射Triton WR1399，这种去垢剂不能被老鼠代谢掉而积累在肝脏的线粒体内，于是这时候的线粒体密度就变小了，便容易与过氧化物酶体分开。

4.细胞系类型免疫原制备过程中的难点和关键点

这是一种以细胞系作为免疫原的方法，通常通过表达目标蛋白的细胞系来产生抗体。细胞系类型免疫原适用于研究蛋白在细胞内的功能和定位。然而，它在构建和维护稳定的细胞系方面较为复杂。

使用细胞系作为免疫原需要更多的流程，包括培养和细胞提取。细胞培养：细胞系的维护和培养需要特别注意，确保细胞的健康和免疫原的高表达。提取方法：从细胞中提取免疫原需要使用合适的方法，以保持蛋白的天然结构和活性。不同细胞系具有不同的特性，选择合适的细胞系至关重要。

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