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抗体酵母展示服务

泰克生物致力于为客户提供高亲和力、高特异性的抗体药物前期发现技术服务,为客户的后续的CAR-T/CAR-NK先导序列设计、抗体人源化、药物靶点抗体开发、抗体偶联药物(ADC)开发、双特异性抗体开发以及高效阻断型中和抗体开发等下游研发工作提供有力支持。泰克生物在药物抗体发现方面拥有10年的项目开发经验和心得,能够为客户提供高质量的针对包括但不限于蛋白、多肽、小分子、病毒、膜蛋白以及mRNA等靶点的驼源VHH发现服务以及不同物种(兔源、鼠源、羊源和驼源等)scFv发现服务。

酵母抗体展示技术(Yeast Display Technology)是指用抗体序列可变区与凝集素Aga2p融合表达,Aga2p蛋白亚基通过两个二硫键与固定在酵母细胞壁上的Aga1p 蛋白亚基结合,结合流式分选技术,将靶向抗原的特异性抗体筛选出来。基于酵母体展示技术(Yeast Technology),泰克生物能够为客户提供高质量的包括但不限于VHH、scFv等单链抗体酵母展示服务,且酵母文库库容可达10^8,文库多样性、插入率、阳性率均可达90%以上,满足各类客户对于抗体酵母展示文库的质量要求。同时,泰克生物还能提供抗体酵母展示配套的下游抗体体外验证(包括但不限于亲和力验证、抗体阻断验证、交叉反应验证等多种下游验证实验)、抗体人源化、抗体亲和力成熟、CAR-T/CAR-NK先导序列设计及细胞杀伤验证等一站式技术服务,客户只需要提供具体的实验需求和靶点信息,泰克生物的科学家均能够根据客户的需求进行合理的方案设计和个性化定制,为客户的科研项目及药物抗体开发助力。

 

█ 酵母展示抗体文库构建服务

 

泰克生物拥有2个动物免疫基地,保证客户项目中免疫的动物背景来源清晰且健康。VHH分子量大小约15kDa,是驼源动物特有的一种抗体重链可变区,免疫原性低且稳定性高,易获得高亲和力、高特异性及有效阻断性的中和抗体,在药物靶点抗体开发、CAR-T/CAR-NK治疗(目前被广泛应用于CAR-T/CAR-NK治疗性抗体,主要以驼源VHH抗体(又被称为纳米抗体)为主)等方面具有天然的优势。酵母展示文库相对噬菌体展示文库技术而言,前者在微量抗体表达后抗体活性层面相较于后者要高,得益此基础,在流式筛选时就能区分抗体的亲和力高低。VHH/scFv抗体酵母展示发现路径如图1所示:

 


抗体酵母展示服务-泰克生物.jpg 

图1基于酵母技术平台的VHH/scFv抗体发现服务

 

█ 服务内容和周期

 

步骤

服务内容

QC标准

周期

Step1:抗原准备

*抗原类型:

(1) 重组蛋白制备

(2) 小分子(改造)+偶联

(3) 多肽合成+偶联

(4) 客户提供灭活病毒

(5) 客户提供封装好的mRNA

抗原QC标准:

重组蛋白3-3.5mg(纯度>85%);

小分子纯度>90%;

多肽纯度>90%;

 

4-6周

Step2:动物免疫

(1) 动物免疫4次,加强免疫一针,共计免疫5针;

(2) 免疫前采集阴性血清,第4针采血进行ELISA检测血清效价;

(3) 若第4针血清抗体效价满足要求,则采血前7天再次加强免疫1针,如不满足要求,则继续常规免疫;

(4) 效价合格,采血分离单核细胞;

动物:背景清晰(年龄,性别,防疫情况);

免疫:蛋白/病毒抗原效价>10^5;多肽/小分子抗原效价>10^4; 

10周

Step3:模板cDNA制备

(1) PBMC总RNA提取(RNA提取试剂盒)

(2) 高保真RT-PCR制备cDNA(反转录试剂盒)

cDNA:胶图分布均匀;

1 天

Step4:抗体酵母展示文库构建

(1) 以文库cDNA为模板,两轮PCR法扩增VHH基因

(2) 酵母展示载体构建与转化: VHH基因拼接酵母展示载体,电击转化酵母菌,构建抗体库

(3) 鉴定:随机挑选48个克隆,PCR鉴定阳性率;测序计算插入正确率和文库多样性

文库阳性率:>90%;

文库插入性率:>90%;

文库多样性>90%

库容:10^7-10^8

3-4周

Step5:文库筛选

(1) 默认3轮筛选:荧光标记蛋白FACS筛选;

(2) 第三轮产物进行NGS测序;同时挑单克隆诱导表达+ELISA检测阳性克隆;

(3) 挑取全部阳性克隆进行基因测序;

阳性标准:FACS和ELISA双阳性菌株;

VHH筛选标准:CDR氨基酸序列不同

3-4周

Step6:抗体验证

(1) 抗体序列构建合适的表达载体进行表达+亲和纯化+抗体定量;

(2) ELISA验证抗体与抗原结合(交付EC50数据);

(3) BLI法验证抗体亲和力;

(4) 细胞功能验证:流式阻断验证;

重组抗体1mg,纯度90%;

快速亲和力测定结果;

阻断验证结果;

4-6周

 

█ 服务优势

 

-- 多种驼源免疫可供选择

-- 拥有免疫基地:动物资源充足,包括但不限于驼源、鼠源、兔源以及羊源等

-- 多种抗体库酵母展示可选:VHH抗体库展示、scFv抗体库展示等

-- 多种靶点抗体发现服务可选:蛋白、多肽、小分子、病毒、膜蛋白、mRNA等

-- 技术平台成熟:库容可达10^7-10^8,插入率均满足>95%,筛选获得的抗体亲和力普遍处于nM-pM级别

-- 高标准交付:效价保证、文库质量保证、高亲和力和高特异性抗体保证,为客户的下游实验提供有力支持

-- 实验记录可追溯:QC质控标准(免疫效价、PBMC质控、文库质控及筛选验证质控),中英文实验报告,原始实验记录

-- 可提供一系列配套的下游药物抗体开发服务,抗体体外表达验证、抗体人源化、抗体亲和力成熟、双特异性抗体开发、CRA-T先导序列分子设计、抗体偶联药物(ADC)开发等

-- 一对一个性化方案定制,满足各类客户的科研项目需求


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抗体酵母展示服务常见问题解答

  • 酵母可能无法有效表达抗体或表达水平较低,影响抗体的产量和活性。

    优化酵母转化条件、选择高效的表达载体、调整培养条件(如温度、pH、培养基成分等)、优化信号肽和抗体基因序列等,以提高抗体的表达水平。

  • 在构建酵母展示抗体文库的过程中,可能会出现杂交或非特异性结合的抗体污染问题。

    严格控制抗体文库的构建过程,采用高质量的抗体基因,通过特异性筛选和鉴定,排除污染的抗体,确保文库的纯度和质量。

  • 抗体文库中可能存在覆盖度不足的问题,即未能覆盖所有感兴趣的抗原。

    通过设计合理的文库构建策略,包括优化抗原的选择、增加文库的容量和多样性、采用多轮筛选等手段,提高文库的覆盖度。

立即咨询抗体酵母展示服务

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