中和单克隆抗体开发服务FAQ-抗体改造与修饰专题-泰克生物-酵母展示服务专家

中和单克隆抗体开发服务FAQ

1. 什么是中和抗体？

答：当外来异物进入生物体内时，生物体内的免疫系统会迅速工作，产生相对应的抗体，和外来异物相结合，使机体免受异物的干扰。而中和抗体是异物入侵机体时产生的能够与异物表面的抗原结合，并通过结合进而去阻止外源病毒识别机体的受体，从而阻断了病毒侵入细胞的途径。也有科学家将能够与某个特殊蛋白质结合，并且干扰它功能的一类抗体都一起称为中和抗体。当病原体侵入机体时需要通过病原体自身的特定结构与机体上的配体相识别，病原体才能感染机体，造成机体患病。中和抗体是一种水溶性的蛋白，是机体在适应免疫发生的过程中自身的细胞所产生的。当机体中有致病病原侵入时，机体的免疫细胞受到刺激后，将中和蛋白分泌出来，然后通过血液运输将中和抗体运送到机体各个部分，使其和病原发生结合，阻止了病毒与机体的结合，将病毒中和。

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中和单克隆抗体的生产

2. 在中和单克隆抗体开发服务，我们可能会出现给动物免疫后没有效价或效价低的情况，我们如何解决？

答：我们在中和单克隆抗体开发服务，选取不携带病原体，健康的动物作为免疫原，但是我们可能会出现选取的抗原分子量大小不适合或者抗原的免疫原性不合适，从而导致的动物免疫后Elisa检测没有效价或者效价达不到预期目标，同时免疫佐剂的选择、免疫程序的不同、免疫原剂量的多少以及免疫方式是口服还是肌肉注射或者皮下注射也会影响我们血清中中和抗体的效价。如果遇到上述类似情况，我们可以先对自己的抗原进行优化，如果抗原是小分子，我们可以使其和大分子进行偶联，增加我们抗原的免疫原性，确保我们抗原分子量不小于25kDa。同时我们也可以去更换不同的免疫佐剂，除了经常使用的弗氏完全佐剂与不完全佐剂外，我们也可以使用其他的新型佐剂，去尝试增加免疫原性。同时我们的免疫程序要根据免疫原和佐剂的不同重新进行设计，不能千篇一律，如果三次免疫过后效价还没有到达预期目标，我们可以进行一次加强免疫，提高效价。同时我们可以采取多点背部注射、腹腔注射、肌肉注射等多部位免疫，提高抗体效价。泰克生物多年来致力于抗体生产研究，能够为客户提供质量保证的抗体，泰克生物能够制备出效价高，特异性强，稳定性好的中和抗体。

3.中和抗体工作的原理是什么？

答：中和抗体是利用阻止病原体表面的受体和细胞识别然后进入细胞的方法来阻止病原体入侵人体。在当病毒有包膜时，中和抗体能够阻止病毒吸附在细胞上并进入细胞。当病毒无包膜时，中和抗体可以与病毒的衣壳蛋白结合，衣壳蛋白就是病毒的蛋白质外壳，可以保护病毒的遗传物质。中和抗体还能够改变病原体的结构和形状，然后阻止病毒进入细胞里面复制，感染机体。在微生物感染中，中和抗体可以快速的消除毒素产生的影响。一旦病毒和中和抗体发生结合，病原体就会被白细胞吞噬，机体的脾脏能够自动过滤病原体，使病原体的代谢物通过泌尿系统排出体外。中和抗体一般是通过被动免疫来完成机体的疾病治疗。泰克生物多年来致力于抗体生产研究，能够为客户提供质量保证的抗体和重组蛋白产品及服务，能够制备出效价高，特异性强，稳定性好的抗体。泰克生物基于抗体平台、蛋白平台等完善的平台体系建设，涵盖了抗体生产的上下游服务，能够实现从抗体制备，到抗体亲和纯化与抗体分离纯化，抗体测序等技术服务。

4.在中和单克隆抗体开发服务，出现细胞融合后没有杂交瘤细胞和细胞不生长的情况，我们如何解决？

答：在中和单克隆抗体的制备服务中，最重要的一步就是完成SP20细胞和脾细胞的融合，两者融合后产生杂交瘤细胞能够持续产生中和抗体。在SP20细胞和脾细胞融合后，我们可能会遇到融合后杂交瘤细胞不生长或长的很少的情况，原因可能是我们在培养杂交瘤细胞时使用的培养基和血清不适合生长，或者融合时我们使用的融合试剂PEG质量不好或者浓度不够，导致细胞没有融合成功。同时制备单克隆抗体小鼠品系的选择也是关键因素之一，在杂交瘤细胞生长时，我们添加的HAT和HT的时间和浓度不合适也会导致融合失败。针对上述原因，我们如何解决融合后杂交瘤细胞不生长或长的很少的情况，泰克生物选择适合的培养基和血清，选择有质量保证的PEG并且泰克生物拥有丰富的中和抗体项目经验，可以帮助客户更好的完成中和抗体的制备，泰克生物选择纯正品系的balb/c小鼠作为免疫动物，选择合适的HAT和HT浓度，促进杂交瘤细胞的生长。同时泰克生物拥有自己的生物细胞间。

5.在中和单克隆抗体开发服务，如何对抗体进行筛选与鉴定，同时抗体如何进行纯化？

答：在中和单克隆抗体开发服务，细胞融合后待其生长到占满孔底的3分之二的程度，我们对融合的杂交瘤细胞上清进行Elisa检测，然后选择阳性克隆孔继续进行亚克隆，但是可能会出现融合后检测不到阳性克隆或者都是阳性克隆的情况。这个时候我们可以先思考一下自己的Elisa步骤是否有错误，设置PBS、阴性对照和阳性对照组确定自己的实验操作没有出现错误，然后我们可以加入空白培养基去检测是否是血清影响了我们的实验结果。最后如果杂交瘤细胞过于小，分泌的抗体不够也可能导致效价不足的情况，我们可以等融合细胞再次生长一段时间。根据来源和单抗制备方法的不同，单克隆抗体样本被分为不同的类型，例如腹水、杂交瘤上清等。将杂交瘤细胞注入到动物的腹腔中生产抗体而获得的样本称为腹水样本，积累在腹水中的单克隆抗体浓度通常较高，适用于进行大规模的抗体生产与纯化。抗体纯化的方法包括Protein A/G 纯化法、离子交换层析法、凝胶过滤、沉淀法、疏水作用色谱法。

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