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抗体亲和力测定服务
泰克生物多年来积累了超过10000+的生物分子间互作亲和力的测定服务。亲和力是评价可逆反应过程中两个分子间相互作用强弱的特征参数,是了解分子以及识别生物学过程、药物的发现与筛选等的重要指标。在药物早期研究开发、筛选鉴定、以及下游生产质控等多方面有重要意义,而且在生命科学基础研究、生物制药开发等领域也有广泛应用。依托于完善的平台构建,泰克生物着力于为客户提供高品质的一站式技术服务,满足不同客户的实验需求。
█ 亲和力测定服务方法
泰克生物基于Octet和Biacore等平台为客户提供准确、快速的亲和力测定服务,根据客户需求提供各具特色的分子间相互作用分析服务,包括但不限于业内常用的检测技术:表面等离振子共振(Surface plasmon resonance, SPR)和生物膜干涉技术(Bio-Layer Interferometry, BLI),保证检测结果准确、客观、可信。我们着力于为客户提供结果准确的检测服务,满足不同客户的实验需求。
图1 SPR测定(Biacore-T200) | 图2 BLI测定 (ForteBio Octet) |
(1) SPR亲和力测定:
SPR亲和力测定通过将一个分子固定在传感芯片表面的形式,将另一分子以溶液形式连续流过芯片,检测器可以实时检测到溶液中分子与芯片表面分子的结合、解离过程。SPR通过实时记录传感器芯片表面分子质量变化,实时监测分子间相互作用信息。
图3 受体蛋白与小分子SPR检测结果
(2) BLI亲和力测定:
BLI亲和力测定是一种光学分析技术,检测的是生物传感器上固定的生物分子表面层厚度的变化。若待测分子与生物传感器尖端的固定相分子发生结合,其数量的变化可致实时测定的干涉图谱发生相应改变,进而得到分子间相互作用信息。
图4 受体蛋白与小分子BLI检测结果
SPR和BLI方法虽然原理上有差异,但是实验检测过程中最终获得的数据具有可比性,均可获得Kd,Koff和Kon值。BLI的方法对于缓冲液的要求相比与SPR方法适应性更广泛一些,比较适合小分子与蛋白之间结合能力的快速扫描,性价比要高。除此之外,泰克生物也为客户提供基于ELISA方法的EC50数据测定,能够有效节约靶向性抗体药物的快速筛选费用和时间。
█ 亲和力测定服务的样品要求
样品类型 | 要求 |
抗体,蛋白,多肽,化合物小分子等 | * 缓冲液:PBS, HEPPS等不含有机试剂,不含Tris,EDTA或DDT; * 蛋白样品(含抗体):200ug,浓度>0.5mg/ml; * 多肽样品:200ug,浓度>1mg/ml; * 化合物小分子:1mg,浓度>1mg/ml,纯度>90%,溶于100%DMSO或者水中。 |
█ 亲和力测定的服务优势
多样化检测平台,满足不同检测需要 | 预CNAS检测认证体系 | 应用范围广泛:可用于蛋白、核酸、多 肽、纳米材料等分子互作分析 | 提供真正的一站式服务体验:提供从亲 和力测定服务,到分子互作研究的一体 化解决方案 |
答:抗体亲和力测定是通过一系列实验方法量化抗体与其靶标(如抗原)之间结合强度的过程。亲和力通常指抗体与抗原结合的紧密程度,通常用解离常数(Kd)来表示。亲和力对抗体的功能至关重要,因为它决定了抗体对抗原的结合能力和其生物学效应。较高的亲和力通常意味着抗体能更高效地识别和结合抗原,从而增强免疫反应或药物疗效。在抗体药物开发过程中,亲和力测定是确保抗体药物有效性和选择性的基础。高亲和力的抗体能够有效靶向疾病相关分子,减少非靶向效应,提升治疗效果。此外,亲和力也决定了抗体的稳定性、清除率和药代动力学特性,这对临床治疗的效果和安全性至关重要。因此,准确测定抗体亲和力对于优化抗体开发和临床应用至关重要。
答:1)、表面等离子共振(SPR):SPR是一种非常灵敏的实时检测方法,可以直接测量抗体与抗原之间的结合动力学(如结合速率和解离速率)。通过这种方法,可以计算出抗体的亲和力常数(Kd),并且该方法不需要标记抗体或抗原,适用于高通量筛选。\n2)、酶联免疫吸附实验(ELISA):ELISA是最常见的亲和力测定方法之一,通过测量抗体与抗原结合后产生的信号强度(如酶标记的底物反应)来估算亲和力。ELISA适用于定量分析抗体的亲和力,但需要通过计算来推算解离常数,且不如SPR灵敏。\n3)、等温滴定量热法(ITC):ITC可以直接测量抗体与抗原结合过程中的热效应,从而获得亲和力、结合位点等信息。ITC提供了一个非常精确的亲和力测定方法,但操作较为复杂,通常用于高精度的研究。\n4)、竞争结合实验:通过测定抗体与不同浓度的抗原竞争结合的能力,也能计算出亲和力。这种方法适用于特定的实验设计,尤其是在复杂样本中筛选抗体时。
答:抗体亲和力的解离常数(Kd)是衡量抗体与抗原结合稳定性的关键指标。Kd值越小,表示抗体与抗原结合的亲和力越强,结合越紧密。对于抗体药物的治疗效果而言,较低的Kd值通常意味着抗体能够在低浓度下有效地结合到靶标,并持续维持这种结合状态,从而增强药物的效力。亲和力强的抗体能够提高靶向疗法的精准性和选择性,减少对非靶标组织的干扰,降低副作用。另一方面,Kd值过低也可能带来一些问题,比如可能导致药物的清除速率过快,或者由于过度高效的结合,可能造成“抗体依赖性细胞毒性”(ADCC)等副作用。因此,药物开发者需要通过亲和力测定来找到一个最佳的亲和力范围,使得抗体既能够高效靶向抗原,又能够在体内保持合适的药代动力学特性。总之,抗体亲和力的精准测定和调控是提高抗体药物治疗效果、减少副作用的重要手段。
答:抗体亲和力测定不仅可以用于评估抗体与抗原的结合强度,还能通过分析结合动力学(如结合速率和解离速率)为研究者提供有关抗体-抗原反应多样性的有价值信息。在复杂的抗原系统中,抗体可能与多个表位或亚表位发生相互作用,产生不同的结合模式。通过抗体亲和力的测定,尤其是使用表面等离子共振(SPR)技术,可以识别出这些不同的反应模式,并量化不同反应的亲和力。具体来说,抗体与抗原的反应可能在多个不同的结合位点发生,形成多种不同的结合状态。这种多样性可能影响抗体的效能和治疗效果。例如,某些抗体可能能够同时识别抗原的多个表位,产生协同效应,从而增强抗体的效应。而其他抗体则可能只对特定的表位具有高亲和力,从而表现出不同的生物学活性。通过对抗体亲和力的详细测定,研究人员能够评估抗体-抗原反应的多样性,选择最具临床潜力的抗体候选者进行进一步的开发。因此,抗体亲和力测定不仅帮助开发者筛选最佳抗体,还能为深入理解抗体-抗原的相互作用提供有力的支持。
答:抗体亲和力测定服务在抗体筛选和药物开发中具有核心作用。首先,亲和力测定可以帮助筛选出与靶标结合最紧密的抗体,从而确保其在后续开发中的有效性,降低成本和时间。其次,亲和力测定为抗体优化提供数据支持,帮助识别最佳结合特性,优化抗体结构,提升药物疗效。此外,亲和力测定还可评估抗体的稳定性和半衰期,优化药代动力学特性,增强药物在体内的表现。因此,亲和力测定服务是抗体筛选、优化及药物开发中不可或缺的工具,极大地促进了抗体药物的成功开发。
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