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重组抗体表达常见问题

Q1：什么是scFv抗体？

A1：scFv抗体，中文全称是单链可变区片段，它是一种通过基因工程改造得到的小分子抗体。scFv由一个抗体的重链可变区和一个轻链可变区通过一条人工设计的短肽连接链连接而成。可变区是抗体的“指纹识别”区域，决定了抗体能特异性地结合哪种抗原；连接肽是一条柔性的氨基酸短链（最常用的是(GGGGS)?），它的作用就像一根绳子，把VH和VL拴在一起，帮助它们形成正确的三维结构，从而行使功能。

Q2：scFv抗体的优势和特点有哪些？

A2：

分子量小：尺寸通常只有完整抗体的约1/6（~25-27 kDa）；

组织穿透力强：更容易穿透致密的组织（如实体瘤），结合更深层次的靶点；

免疫原性低：去除了Fc段，减少了被机体免疫系统识别和清除的可能性；

易于基因工程操作：结构简单，易于通过基因克隆技术在细菌、酵母等系统中进行大规模、低成本的生产。

多功能性：可以作为“构建模块”，进一步组装成更复杂的抗体形式（如双特异性抗体、免疫毒素，以及CAR-T细胞中的核心识别部件）。

Q3：scFv抗体存在的缺点

A3：

稳定性相对较差：由于缺少Fc段的支撑，某些scFv在体内外的稳定性可能不如完整抗体，半衰期较短，但是后期应用是检测试剂盒的话，半衰期短则是它的一个优势；

无效应功能：因为去除了Fc段，所以无法直接激活免疫系统的杀伤功能（如ADCC、CDC作用）。如果需要这些功能，通常会将scFv与Fc片段融合，形成scFv-Fc。

Q4：scFv抗体主要的应用领域有哪些？

A4：

靶向治疗与药物递送：将scFv与毒素、放射性同位素或药物连接，制成“生物导弹”，精准攻击肿瘤细胞；

CAR-T细胞疗法：scFv是构成CAR（嵌合抗原受体）的抗原结合域的核心部分，负责识别肿瘤细胞表面的特定靶标；

分子影像诊断：用放射性核素标记scFv，通过PET/CT等成像技术，实现病灶的精准定位；

基础研究工具：作为细胞内抗体，在细胞内部中和特定蛋白的功能，用于研究基因功能。

Q5：scFv抗体在纯化过程中产量很低且易降解，该如何改善上述状况

A5：首先应排除表达体系的问题，即细胞问题，转染问题，纯化的溶液组分及PH等，其次应考虑scFv抗体的序列问题，scFv抗体本身结构就不稳定容易降解，可以引入Fc片段稳定其结构，除此之外还可以对抗体的序列进行小范围改造，在连接肽中引入带电氨基酸（如谷氨酸、赖氨酸），提高稳定性和溶解度，还可以增加两个半胱氨酸引入二硫键。

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