酵母杂交技术服务-泰克生物-酵母展示服务专家

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酵母杂交技术服务

泰克生物（Tek Biotech）经过多年的发展，积累了丰富的免疫学研究与检测经验，拥有丰富的酵母文库构建经验，以此为基础为全球客户提供高质量的酵母杂交技术服务，包括酵母cDNA文库构建技术服务，酵母单杂交技术服务和酵母双杂交技术服务。

█ 酵母杂交技术服务类型

泰克生物借助成熟的酵母表面展示技术平台，建立了酵母杂交验证体系。与抗体酵母表面展示技术原理基本类似，酵母杂交技术根据检测的类型可以分为：酵母单杂交，酵母双杂交和酵母三杂交，泰克生物为客户提供酵母单杂交和酵母双杂交技术服务。

-- 酵母cDNA文库构建服务

常规构建cDNA文库构建方法有两种：SMART技术和Gateway技术，天津泰克生物擅长利用SMART方法结合同源重组的方式（Gateway方法的同源方式）进行cDNA展示文库的构建工作。如图1所示，SMART方法合成cDNA文库：

酵母杂交技术服务-泰克生物1.png

图1 SMART方法合成cDNA文库示意图

更多关于酵母cDNA文库构建技术，请参阅酵母cDNA表达文库构建服务

-- 酵母单杂技术服务（Yeast one-hybrid system，Y1H）

酵母单杂交体系属于细胞核内互作验证系统，借助一些细胞转录激活因子的双相功能特征搭建的一个基因报告系统。在具体的实验操作中，常用转录激活因子GAL4作为桥梁，连通上下游的信号的转导，其基本原理在于转录因子GAL4能够调控酵母半乳糖苷酶基因表达，当酵母发生半乳糖苷酶表达时，在含有X-gal的平板上半乳糖苷酶催化X-gal产生蓝色的菌落。

如图2所示，转录因子GAL4含有两个能够独立发挥功能作用的结构域：转录激活结构域（AD）和DNA结合结构域（BD）。将含有各种cDNA序列的文库克隆进带有GAL4-AD的表达载体中，形成载体1；将顺式作用元件克隆带有GAL4-BD的载体中，形成载体2。然后将载体1和载体2共同转化进入同一个酵母细胞中进行共表达：如果载体1中，cDNA-GAL4-AD表达后的融合蛋白能够结合载体2中的顺势作用元件，载体1中的GAL4的AD与载体2中的BD结合在一起形成完整的转录因子GAL4，GAL4与半乳糖苷酶基因上游结合，促使半乳糖苷酶基因表达后产生酶活催化作用（即报告基因）

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图2 酵母单杂交系统原理

更多关于酵母单杂交技术内容，请参阅酵母单杂交技术服务

-- 酵母双杂交系统（Yeast two-hybrid system，Y2H）

与酵母单杂交技术类似，酵母双杂交技术是利用转录激活因子具有两个不同的结构域：DNA结合结构域（DNA binding domain，DNA-BD）和转录激活结构域（activation domain,AD）,上述两个结构可以单独发挥功能且互不影响，但是只有当二者在空间上充分接近，才能行使完整的转录激活因子的活性，使得受其调控的下游基因得到转录。在酵母双杂交系统中，将DNA-BD结构域和转录因子AD结构域分别与X（诱饵蛋白）融合和Y（猎物蛋白）形成融合蛋白。DNA-BD结构域-X融合蛋白可以识别并结合报告基因的上游激活子序列（UAS：Upstream Activation Sequence）。如果DNA-BD结构域-X融合蛋白与猎物蛋白 Y之间具有相互作用，这会使DNA-AD结构域与BD结构域相互靠近并重新结合构成具有启动报告基因功能的完整蛋白，最终让报告基因发生表达，如图3所示：

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图3 酵母双杂交系统原理

天津泰克生物提供为客户提供两种形式的酵母双杂交技术服务：酵母双杂交技术（核系统）服务和酵母双杂交技术（膜系统）服务，以满足客户不同的项目需求。

（1）酵母双杂交技术（核系统）服务

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图4 酵母双杂技术（核系统）示意图

如图4所示，酵母双杂交技术（核系统）类似于酵母单杂交技术，借助转录激活因子GAL4进行文库构建以及筛选工作。将含有各种cDNA序列的文库克隆进带有GAL4-AD的表达载体中，形成载体1；将顺式作用元件克隆带有GAL4-BD的载体中，形成载体2。然后将载体1和载体2共同转化进入同一个酵母细胞中，进行共表达：如果载体1中，cDNA-GAL4-AD表达后的融合蛋白能够结合载体2中的顺势作用元件，载体1中的GAL4的AD与载体2中的BD结合在一起形成完整的转录因子GAL4，GAL4与半乳糖苷酶基因上游结合，促使半乳糖苷酶基因表达后产生酶活催化作用（即报告基因）

更多关于酵母双杂交技术（核系统）内容，请参阅酵母双杂交技术（核系统）服务

（2）酵母双杂交技术（膜系统）服务

酵母双杂交技术（膜系统）是用于验证膜蛋白以及胞质蛋白的相互作用。膜蛋白互作酵母双杂系统是基于泛素（split-ubiquitin）介导的分离-合并-切割系统搭建的，泛素蛋白分成2个结构域：N端结构域（称为：Nub结构域）和C端结构域（称为：Cub结构域），这两个结构域在同一个细胞内部靠近后能够形成完整的泛素蛋白，泛素蛋白可以被泛素特异性蛋白酶（UBP，ubiquitin binding proteins; 该酶识别完整的泛素蛋白）识别。基本原理如图5所示：

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图5 膜蛋白互作酵母双杂系统示意图

更多关于酵母双杂交技术（膜系统）内容，请参阅酵母双杂交技术（膜系统）服务

█ 酵母表面展示技术平台服务优势

技术专家直接服务，满足不同检测需要

结果真实可靠，性价比高

检测服务效率高，过程实时监控

检测仪器灵敏度高，样品消耗量低

实验周期短，节省等待时间

提供一站式服务：从构建文库到阳性克隆的筛选，提高效率，避免错误，节省费用

酵母杂交技术服务常见问题解答

什么是酵母杂交技术？

答：酵母杂交技术是一种基于酵母细胞的基因表达和筛选方法，主要用于研究蛋白质-蛋白质相互作用、抗体筛选、酶的功能研究以及多肽和抗体的优化。该技术通过将两种或多种基因（如编码不同蛋白的基因）引入酵母细胞，并通过酵母的“杂交”机制使得不同来源的基因或蛋白质互相作用。这项技术能够在酵母细胞内实现高效表达和筛选，具有高通量和高效率的优势。酵母杂交技术广泛应用于药物开发、抗体筛选、酶优化等领域。
酵母杂交技术如何进行抗体筛选？

答：酵母杂交技术在抗体筛选中具有高效和高通量的优势。首先，将包含抗体基因的文库通过转染技术导入酵母细胞，表达出展示在酵母表面的单克隆抗体。然后，使用特定的抗原进行筛选，只有与抗原特异性结合的抗体能够在酵母细胞上被稳定展示。通过流式分选技术，能够将与靶标抗原结合的抗体从大量不相关抗体中筛选出来。整个过程既高效又灵活，适用于构建和筛选大规模抗体库。筛选得到的抗体可以进一步用于疾病诊断、靶向治疗和疫苗研发等应用。
酵母杂交技术如何优化抗体亲和力？

答：在抗体筛选和优化中，酵母杂交技术能够帮助优化抗体的亲和力。通过对抗体基因进行定点突变、亲和力成熟以及多轮筛选，可以有效提高抗体与靶标的亲和力。在酵母杂交中，抗体通过与抗原的结合能力被筛选出来，因此，反复的亲和力筛选可以帮助发现具有更强结合力的抗体。此外，通过优化表达条件、控制选择压力，还可以使抗体在体外表现出更高的稳定性和特异性。这使得酵母杂交技术在抗体亲和力优化和抗体药物开发中具有重要的应用价值。
酵母杂交技术如何在酶筛选中发挥作用？

答：酵母杂交技术在酶筛选中的应用可以有效帮助优化酶的活性、稳定性和特异性。通过将含有酶基因的文库引入酵母细胞，并进行高通量筛选，能够筛选出与特定底物具有高亲和力和活性的酶。该技术的优势在于其高效的基因表达能力和快速的筛选速度，使得酶的优化过程更加高效。通过结合流式分选技术，可以从大量的酶突变体中挑选出具有理想性能的酶，广泛应用于生物催化、环境保护以及食品工业等领域。
酵母杂交技术的文库构建需要哪些步骤？

答：酵母杂交技术的文库构建通常包括几个关键步骤。首先，选择目标基因或抗体基因，设计合适的引物，通过PCR扩增得到目标基因。然后，将基因克隆到合适的酵母表达载体中，通常使用酵母表达系统如pYES系列载体。接下来，将构建好的载体转化到酵母细胞中，通过选筛获得稳定的转化子。最后，为了确保文库的多样性，需要通过合适的方法进行扩增和优化，确保文库中包含足够多的独特基因，供后续的筛选和分析使用。

什么是酵母杂交技术？

答：酵母杂交技术是一种基于酵母细胞的基因表达和筛选方法，主要用于研究蛋白质-蛋白质相互作用、抗体筛选、酶的功能研究以及多肽和抗体的优化。该技术通过将两种或多种基因（如编码不同蛋白的基因）引入酵母细胞，并通过酵母的“杂交”机制使得不同来源的基因或蛋白质互相作用。这项技术能够在酵母细胞内实现高效表达和筛选，具有高通量和高效率的优势。酵母杂交技术广泛应用于药物开发、抗体筛选、酶优化等领域。
酵母杂交技术如何进行抗体筛选？

答：酵母杂交技术在抗体筛选中具有高效和高通量的优势。首先，将包含抗体基因的文库通过转染技术导入酵母细胞，表达出展示在酵母表面的单克隆抗体。然后，使用特定的抗原进行筛选，只有与抗原特异性结合的抗体能够在酵母细胞上被稳定展示。通过流式分选技术，能够将与靶标抗原结合的抗体从大量不相关抗体中筛选出来。整个过程既高效又灵活，适用于构建和筛选大规模抗体库。筛选得到的抗体可以进一步用于疾病诊断、靶向治疗和疫苗研发等应用。
酵母杂交技术如何优化抗体亲和力？

答：在抗体筛选和优化中，酵母杂交技术能够帮助优化抗体的亲和力。通过对抗体基因进行定点突变、亲和力成熟以及多轮筛选，可以有效提高抗体与靶标的亲和力。在酵母杂交中，抗体通过与抗原的结合能力被筛选出来，因此，反复的亲和力筛选可以帮助发现具有更强结合力的抗体。此外，通过优化表达条件、控制选择压力，还可以使抗体在体外表现出更高的稳定性和特异性。这使得酵母杂交技术在抗体亲和力优化和抗体药物开发中具有重要的应用价值。
酵母杂交技术如何在酶筛选中发挥作用？

答：酵母杂交技术在酶筛选中的应用可以有效帮助优化酶的活性、稳定性和特异性。通过将含有酶基因的文库引入酵母细胞，并进行高通量筛选，能够筛选出与特定底物具有高亲和力和活性的酶。该技术的优势在于其高效的基因表达能力和快速的筛选速度，使得酶的优化过程更加高效。通过结合流式分选技术，可以从大量的酶突变体中挑选出具有理想性能的酶，广泛应用于生物催化、环境保护以及食品工业等领域。
酵母杂交技术的文库构建需要哪些步骤？

答：酵母杂交技术的文库构建通常包括几个关键步骤。首先，选择目标基因或抗体基因，设计合适的引物，通过PCR扩增得到目标基因。然后，将基因克隆到合适的酵母表达载体中，通常使用酵母表达系统如pYES系列载体。接下来，将构建好的载体转化到酵母细胞中，通过选筛获得稳定的转化子。最后，为了确保文库的多样性，需要通过合适的方法进行扩增和优化，确保文库中包含足够多的独特基因，供后续的筛选和分析使用。

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