双特异性适配体开发服务-泰克生物-酵母展示服务专家

技术服务

询价与订购

姓名*
电话号码*
电子邮件*
产品名称*
描述*

双特异性适配体开发服务

泰克生物拥有专业的研发团队，专注于抗体药物开发领域的探索，尤其在适配体体外筛选及亲和力评估方面积累了深厚的经验，助力客户在抗体药物开发实验项目中实现成本的有效控制。泰克生物能够为客户提供涵盖基因分析合成、适配体体外筛选、合成以及亲和力测定的全方位服务。根据客户提供的样本信息，泰克生物运用SELEX适配体筛选方法，针对靶标物质展开适配体体外筛选，获取针对该靶标的适配体序列，这些序列涵盖RNA、DNA及寡核苷酸等多种形式。利用获得的序列来合成适配体，将单个靶点适配体与 RNA 接头融合，能够同时阻断两个靶点，获得双特异性核酸适配体，可以同时识别两个或多个不同的细胞表面受体，靶向两种不同分子。泰克生物提供的服务为后续的适配体功能验证及靶向特定分子的抗体药物开发工作提供坚实的支撑。

泰克生物为客户提供多样化的SELEX适配体筛选服务，适用于各类样品（如蛋白、多肽、氨基酸及小分子物质等）的适体开发。通过运用多种筛选策略，如磁珠-SELEX、细胞-SELEX及捕获-SELEX等，在历经6至10轮的严格筛选后，能够鉴别出具有极高特异性的核酸适配体。文库容量高达10^14，足以确保针对客户特定靶点筛选出高亲和力的核酸适配体。利用NGS测序技术，可以获取5至15条针对目标分子的适配体序列。且筛选出的核酸适配体的结合亲和力，可以达到nM级别至pM级别。泰克生物将单个适配体与双链 RNA 接头蛋白融合在一起进行双特异性核酸适配体开发，且在接头体和适配体之间留出2-3个不配对的碱基，为单个适配体预留出空间，接头包括核苷酸、肽、有机链和无机材料。

同时，泰克生物也致力于为客户提供一整套下游服务体系，包括在适配体筛选完成后，进行适配体的合成、亲和力评估等环节，从而全面辅助推进客户的实验项目。泰克生物的科研团队能够依据客户的具体实验要求，精心分析并制定贴合实际的方案，推出个性化定制服务，力保每位客户的特殊需求都能获得妥善满足。

█ 双特异性适配体开发服务

通过SELEX适配体筛选技术，能够获得与目标物质结合的适配体序列。双特异性核酸适配体能够同时结合两个不同的靶点，在治疗、诊断以及生物研究中前景广阔。用linker连接两个不同靶点的适配体，通过融合单个靶点适配体和双链 RNA 接头，来进行双特异性适配体开发。并且经过验证可知，双特异性适配体比单个适配体能发挥的作用更强，其原因可能是由于双特异性适配体比单个适配体的循环时间有所增加。当用于免疫时，适配体通常通过寡核苷酸接头连接，T 细胞上的 DNA 适配体能够与其他适配体偶联，此外，也能利用纳米抗体与适配体共修饰的脂质体来连接。泰克生物基于 RNA 的双特异性适配体，将单个靶点适配体与双链 RNA 接头融合，其具体流程见图1。

双特异性适配体开发服务流程-泰克生物.png

图1 双特异性适配体开发服务流程

█ 服务内容和周期

步骤

服务内容

周期

Step1：核酸适配体文库构建与筛选

(1) 固定序列与随机序列的合成，体外构建适配体文库；

(2) 生物素标记目标靶标作为筛选靶点；

(3) 适配体文库筛选与富集：PCR扩增富集+转录+跑胶回收，一般为6-10轮；

(4) 筛选产物进行NGS测序；

(5) 交付：适配体序列 5-15 条，实验报告，原始数据（包括NGS测序原始数据、胶图）

10-15周

Step2：

双特异性适配体合成和亲和力测定

(1) 根据序列进行适配体合成；与双链 RNA 接头融合，获得双特异性适配体；

(2) 双特异性适配体与目标靶点进行亲和力测定，BLI或SPR，进行KD测定；

(3) 交付：实验报告，原始数据

6-8周

█ 服务优势


多筛选靶点多样	文库库容庞大	连接效率高	SELEX技术平台成熟	实验记录详尽可追溯	一对一个性化方案定制	筛选方式多样	筛选轮次充足
涵盖蛋白、多肽、氨基酸、小分子等多种类型	达到10^14量级，足以筛选出针对客户靶点的核酸适配体	基于 RNA 的双特异性适配体，将单个靶点适配体与双链 RNA 接头融合，连接效率高	筛选所得核酸适配体的亲和力可达nM至pM级别	遵循QC质控标准，提供中英文实验报告及原始实验记录	包括筛选方案以及后续的验证方案等，满足各类客户的科研项目需求	包括磁珠-SELEX、细胞-SELEX、捕获-SELEX等多种方法	经过6至10轮压力筛选，确保获得高亲和力、高特异性的核酸适配体

双特异性适配体开发服务常见问题解答

什么是双特异性适配体开发服务？

答：双特异性适配体可以同时识别两个或多个不同的细胞表面受体，可以同时靶向两种不同分子，表现出更好的治疗效果和激发较少的耐药性方面优于传统的单克隆抗体。双特异性分子采用二合一形式，给药复杂性较低，并且比拟议的两种单分子组合使用更有利的监管批准。然而，基于抗体的双特异性分子也受到免疫原性高、生产困难等复杂技术的影响。我们开发了一种基于 RNA 的双特异性适配体，通过将单个靶点适配体与双链 RNA 接头融合，能够同时阻断两个靶点。研究发现双特异性适配体在抑制细胞生长和诱导细胞凋亡的能力方面比单个适配体更有效。当这些适配体在测试时，双特异性适配体比单独或联合使用单个适配体更显着地抑制腹膜内肿瘤生长。双特异性适配体的增强功效很可能归因于其比单个适配体循环时间增加。此外，我们表明双特异性适配体对宿主没有毒性，并且无法触发先天免疫原性。
双特异性适配体的各种链接方式有那些？

答：我们将单个适配体与23bp双链 RNA 接头蛋白融合在一起，并故意在接头体和适配体之间留出2-3个不配对的碱基，以便为每个单个适配体提供空间空间。接头可由各种生物合成结构单元组成，如核苷酸、肽、有机链和无机材料。对于涉及免疫调节 bsApt 的研究，适配体模块通常通过寡核苷酸接头连接。几乎每个 bsApt 构建体都使用了不同的序列。将对存在于幼稚 T 细胞上的 CD62L（适配体 LD201t1）具有亲和力的 DNA 适配体与识别 PTK7（适配体 sgc8）、PD-L1（适配体 PD-L1）或全 Ramos 细胞（B 细胞淋巴瘤;适配体 TE02）的其他适配体偶联。这些适配体偶联物被称为环状bsApts的 5' 和3' 末端连接在一起，因为在杂交13-nt侧翼互补序列后，使用T4 DNA连接酶将5' 和 3' 末端连接在一起。但是这种偶联因为如果没有自由末端，c-bsApts将更能抵抗血清核酸外切酶的降解。除了上述基于核酸的联接方式外，还存在一种利用纳米抗体与适配体共修饰的脂质体作为联接方式的策略。
双特异性适配体链接中接头对于适配体特性的影响？

答：大多数免疫调节 bsApt 使用ssDNA 或长度为15-25 nt（～105-175 A）的双链寡核苷酸接头。研究人员发现，7-22 nt （～49-152 A）的接头长度介导了显著的细胞毒性作用，而接头长度超过29 nt （～200 A）则没有。接头组成在决定其刚性方面也起着作用，这会影响结合域的构象熵和3D呈现。大多数研究都使用了双链接头，因此构成了更严格的设计。只有两组使用刚度较低的单链接头。还有研究表明，同时包含ssDNA和双链 DNA（dsDNA）部分的柔性接头（与仅 dsDNA 相比）在形成细胞间连接方面效果较差，他们将其归因于热稳定性差。其他研究表明，位于其23-nt接头序列两侧的2或 3 个未配对的核苷酸对功能至关重要。当 bsApt 使用完全配对的接头或只有一个未配对核苷酸的接头时，它们失去了特异性和细胞毒性作用。这些未配对的核苷酸为每个适配体提供了形成其 3D 结构的空间自由度。每项研究中使用的接头表明，只要接头不影响适配子的折叠和稳定性，各种特性对于概念验证设计来说都是可以接受的。
双特异性适配体配体的命名及其优势？

答：免疫调节 bsApts 可以使用 [m + n] 命名法根据两个适配体模块的化合价和特异性进行分类，其中 [m] 对应于肿瘤靶向适配子模块的化合价，[n] 对应于免疫细胞靶向适配子模块的化合价。例如，[1 + 2] 名称描述了由一个结合目标肿瘤细胞的适配体和两个结合免疫细胞的适配体组成的构建体。大多数激动共刺激受体的免疫细胞靶向适配体确实需要二价设计（[n] = 2），因为需要通过其二聚体形式的受体交联来诱导信号传导和 T 细胞活化。其他作为单体发挥作用的适配体（例如，定位于 TAA、自然杀伤 [NK] 细胞活化、拮抗作用）可以使用 [1 + 1] 设计。一些化合价增加的 bsApt 的主要目标是增加其靶标的亲和力，无论是在肿瘤还是免疫细胞上。尽管目前文献中没有三特异性免疫调节适配体，但它们的设计仍然可以使用这种命名法进行分类。[1 + 1] 设计可有效使免疫细胞靠近肿瘤细胞，以产生沉默的细胞间连接或细胞毒性免疫突触，如多种措施所示。1 + 2] 设计增加了靶向免疫细胞的适配体的化合价。迄今为止，使用该设计描述的所有免疫调节 bsApts 都包含二聚体适体，该适体会激动免疫细胞上的共刺激受体。
双特异性适配体的应用有哪些？

答：研究人员发现CIL-6A6-1 的双特异性环状适配体，该适配体能够高亲和力结合 IL-6 和 sIL-6R，并且在血清中稳定超过 48 小时。可有效阻断 IL-6/sIL-6R 相互作用，显著抑制细胞炎症。最重要的是，这种双特异性适配体比单独结合适配体以及市售的托珠单抗有效得多，突出了选择双特异性环状适配体作为抗炎治疗的分子工具的优势。研究人员开发了一种 TME 独特的化学特征作为途径的去特异性检测肿瘤细胞及其升高的蛋白表达。通过设计一个带有一个臂的双特异性适配体来实现这一点，检测高度表达的肿瘤相关代谢物 ATP 和检测其他T 细胞淋巴瘤上表达的细胞表面标志物。在各种体外和体内临床前模型中，双特异性适配子（bsApts）已被证明可以诱导人工免疫突触，促进 T 细胞活化和随后的肿瘤细胞裂解。双特异性适配子也可能作为靶向增强针对表达 MUC1 的恶性肿瘤的抗肿瘤免疫反应的新策略。

什么是双特异性适配体开发服务？

答：双特异性适配体可以同时识别两个或多个不同的细胞表面受体，可以同时靶向两种不同分子，表现出更好的治疗效果和激发较少的耐药性方面优于传统的单克隆抗体。双特异性分子采用二合一形式，给药复杂性较低，并且比拟议的两种单分子组合使用更有利的监管批准。然而，基于抗体的双特异性分子也受到免疫原性高、生产困难等复杂技术的影响。我们开发了一种基于 RNA 的双特异性适配体，通过将单个靶点适配体与双链 RNA 接头融合，能够同时阻断两个靶点。研究发现双特异性适配体在抑制细胞生长和诱导细胞凋亡的能力方面比单个适配体更有效。当这些适配体在测试时，双特异性适配体比单独或联合使用单个适配体更显着地抑制腹膜内肿瘤生长。双特异性适配体的增强功效很可能归因于其比单个适配体循环时间增加。此外，我们表明双特异性适配体对宿主没有毒性，并且无法触发先天免疫原性。
双特异性适配体的各种链接方式有那些？

答：我们将单个适配体与23bp双链 RNA 接头蛋白融合在一起，并故意在接头体和适配体之间留出2-3个不配对的碱基，以便为每个单个适配体提供空间空间。接头可由各种生物合成结构单元组成，如核苷酸、肽、有机链和无机材料。对于涉及免疫调节 bsApt 的研究，适配体模块通常通过寡核苷酸接头连接。几乎每个 bsApt 构建体都使用了不同的序列。将对存在于幼稚 T 细胞上的 CD62L（适配体 LD201t1）具有亲和力的 DNA 适配体与识别 PTK7（适配体 sgc8）、PD-L1（适配体 PD-L1）或全 Ramos 细胞（B 细胞淋巴瘤;适配体 TE02）的其他适配体偶联。这些适配体偶联物被称为环状bsApts的 5' 和3' 末端连接在一起，因为在杂交13-nt侧翼互补序列后，使用T4 DNA连接酶将5' 和 3' 末端连接在一起。但是这种偶联因为如果没有自由末端，c-bsApts将更能抵抗血清核酸外切酶的降解。除了上述基于核酸的联接方式外，还存在一种利用纳米抗体与适配体共修饰的脂质体作为联接方式的策略。
双特异性适配体链接中接头对于适配体特性的影响？

答：大多数免疫调节 bsApt 使用ssDNA 或长度为15-25 nt（～105-175 A）的双链寡核苷酸接头。研究人员发现，7-22 nt （～49-152 A）的接头长度介导了显著的细胞毒性作用，而接头长度超过29 nt （～200 A）则没有。接头组成在决定其刚性方面也起着作用，这会影响结合域的构象熵和3D呈现。大多数研究都使用了双链接头，因此构成了更严格的设计。只有两组使用刚度较低的单链接头。还有研究表明，同时包含ssDNA和双链 DNA（dsDNA）部分的柔性接头（与仅 dsDNA 相比）在形成细胞间连接方面效果较差，他们将其归因于热稳定性差。其他研究表明，位于其23-nt接头序列两侧的2或 3 个未配对的核苷酸对功能至关重要。当 bsApt 使用完全配对的接头或只有一个未配对核苷酸的接头时，它们失去了特异性和细胞毒性作用。这些未配对的核苷酸为每个适配体提供了形成其 3D 结构的空间自由度。每项研究中使用的接头表明，只要接头不影响适配子的折叠和稳定性，各种特性对于概念验证设计来说都是可以接受的。
双特异性适配体配体的命名及其优势？

答：免疫调节 bsApts 可以使用 [m + n] 命名法根据两个适配体模块的化合价和特异性进行分类，其中 [m] 对应于肿瘤靶向适配子模块的化合价，[n] 对应于免疫细胞靶向适配子模块的化合价。例如，[1 + 2] 名称描述了由一个结合目标肿瘤细胞的适配体和两个结合免疫细胞的适配体组成的构建体。大多数激动共刺激受体的免疫细胞靶向适配体确实需要二价设计（[n] = 2），因为需要通过其二聚体形式的受体交联来诱导信号传导和 T 细胞活化。其他作为单体发挥作用的适配体（例如，定位于 TAA、自然杀伤 [NK] 细胞活化、拮抗作用）可以使用 [1 + 1] 设计。一些化合价增加的 bsApt 的主要目标是增加其靶标的亲和力，无论是在肿瘤还是免疫细胞上。尽管目前文献中没有三特异性免疫调节适配体，但它们的设计仍然可以使用这种命名法进行分类。[1 + 1] 设计可有效使免疫细胞靠近肿瘤细胞，以产生沉默的细胞间连接或细胞毒性免疫突触，如多种措施所示。1 + 2] 设计增加了靶向免疫细胞的适配体的化合价。迄今为止，使用该设计描述的所有免疫调节 bsApts 都包含二聚体适体，该适体会激动免疫细胞上的共刺激受体。
双特异性适配体的应用有哪些？

答：研究人员发现CIL-6A6-1 的双特异性环状适配体，该适配体能够高亲和力结合 IL-6 和 sIL-6R，并且在血清中稳定超过 48 小时。可有效阻断 IL-6/sIL-6R 相互作用，显著抑制细胞炎症。最重要的是，这种双特异性适配体比单独结合适配体以及市售的托珠单抗有效得多，突出了选择双特异性环状适配体作为抗炎治疗的分子工具的优势。研究人员开发了一种 TME 独特的化学特征作为途径的去特异性检测肿瘤细胞及其升高的蛋白表达。通过设计一个带有一个臂的双特异性适配体来实现这一点，检测高度表达的肿瘤相关代谢物 ATP 和检测其他T 细胞淋巴瘤上表达的细胞表面标志物。在各种体外和体内临床前模型中，双特异性适配子（bsApts）已被证明可以诱导人工免疫突触，促进 T 细胞活化和随后的肿瘤细胞裂解。双特异性适配子也可能作为靶向增强针对表达 MUC1 的恶性肿瘤的抗肿瘤免疫反应的新策略。

立即咨询双特异性适配体开发服务