浅谈酵母双杂技术-酵母展示技术专题-泰克生物-酵母展示服务专家

浅谈酵母双杂技术

1989年，Fields等人在进行真核基因转录调控的研究时，初步建立了酵母双杂交体系，这是一种利用酵母遗传学方法分析蛋白质之间相互作用的分子生物学技术。该技术基于真核细胞中转录因子（如GAL4）的结构和功能特点，GAL4有两个互不干扰的结构域，两个结构域在分开时会行驶它们各自的功能，DNA结合域（DNA Binding Domain, BD）具有DNA的结合功能，转录活化结构域（Activation Domain, AD）有激活转录的功能，将两者连在一起会具有转录活性。将待研究的两种蛋白质分别与GAL4的BD和AD融合表达，能够形成两种融合蛋白。当这两种蛋白同时转入酵母细胞后，能够在酵母细胞内发生相互作用时，会促使BD与AD在空间上接近，进而激活特定的报告基因，如LacZ、HIS3等，如果两种蛋白没有发生相互作用，报告基因就不会表达。通过检测报告基因的是否表达，可以间接判断两种蛋白之间是否存在相互作用。

酵母双杂交技术原理图-泰克生物.png

Fig.1 酵母双杂交技术原理图

酵母双杂交技术的应用：

酵母双杂技术灵敏度高，且能够在细胞内模拟真实的蛋白质相互作用环境，不仅可以用来验证已知蛋白之间的相互作用，还能够筛选编码未知蛋白的基因，已经被广泛应用于蛋白质组学、细胞信号转导以及药物筛选等多个领域。利用酵母双杂交技术可以快速、高通量地筛选蛋白质之间的相互作用，为生物体内的蛋白质互作网络的构建提供了重要的数据支持，有利于为疾病诊断和治疗提供新的靶点。通过酵母双杂交技术，可以发现与已知蛋白有相互作用的未知蛋白，进而去发现新的基因。酵母双杂交技术可以用于药物作用位点的筛选，以及研究药物对蛋白质之间相互作用的影响，有助于药物的优化和改造。随着DUALmembrane系统等新技术的出现，酵母双杂交技术能够被用于膜蛋白的研究，有助于揭示膜蛋白在细胞信号转导中的作用。

酵母双杂文库构建：

酵母双杂交技术中的一个重要环节是酵母双杂文库构建，用于筛选与特定蛋白质相互作用的未知蛋白。首先从目标组织中提取总RNA，并分离纯化出mRNA。将mRNA逆转录成cDNA，并通过PCR进行扩增。将cDNA与AD载体连接，构建AD文库，其中，文库构建方法有SMART扩增技术和Gateway重组技术两种，根据起始RNA量去选择合适的方法。SMART技术可以连续合成5'非翻译区的序列，而Gateway技术则利用专有的重组序列使得DNA片段能够更有效地被转入质粒当中，适用于大片段的基因克隆。对构建的文库进行质量控制的检验，包括库容量鉴定、插入片段大小鉴定等，以确保文库的质量和可靠性。最后将含有BD-X融合蛋白的质粒与AD文库共同转化到酵母细胞中，通过筛选报告基因的表达情况来鉴定与蛋白相互作用的未知蛋白。

泰克生物致力于为客户提供高质量的酵母展示服务，基于酵母展示技术，泰克生物能够为客户提供高质量的抗体酵母双杂文库构建服务，包括但不限于VHH、scFv等单链抗体酵母展示技术，且酵母文库库容可达10^8，文库多样性、插入率、阳性率均可达90%以上，满足各类客户对于抗体酵母展示文库的质量要求。同时，泰克生物还能提供抗体酵母展示配套的下游抗体体外验证（包括但不限于亲和力验证、抗体阻断验证、交叉反应验证等多种下游验证实验）、抗体人源化、抗体亲和力成熟、CAR-T/CAR-NK先导序列设计及细胞杀伤验证等一站式技术服务，客户只需要提供具体的实验需求和靶点信息，我们能够根据客户的需求进行合理的方案设计和个性化定制，为客户的科研项目及药物抗体开发助力。