酵母三杂交服务-酵母展示技术专题-泰克生物-酵母展示服务专家

酵母三杂交服务

泰克生物拥有经验丰富的研发团队，能够为客户提供高质量的酵母三杂交服务，来探究蛋白质及其与其他生物分子间的相互作用。同时，泰克生物也能提供多种定制化的服务（包括但不限于蛋白互作验证、不同样本的酵母三杂交cDNA文库（动物组织、植物组织、细胞等各类种属样本的cDNA文库）构建、随机多肽文库构建、靶向蛋白/小分子多肽的筛选等各类酵母三杂交服务）。根据客户提供的靶蛋白序列信息、需要酵母杂交筛库以及构建文库的种类、样本信息，泰克生物就可以为客户定制合理的酵母杂交技术实验方案，基于标准化的实验流程，为客户已知蛋白的互作验证、酵母三杂文库构建与酵母杂交筛库，以及基于酵母三杂交原理的多肽文库的构建和筛选、潜在互作蛋白/小分子多肽的发现和验证、小分子多肽靶向药物的开发等下游研发工作提供有力支持。

泰克生物有着完善的酵母杂交技术体系，以及基于酵母三杂交的蛋白互作验证平台，酵母三杂交体系凭借其独特的体内互作验证能力，能够确保互作蛋白接近其天然构象，结果也更加靠谱。泰克生物的酵母三杂交cDNA文库和多肽文库具有高库容量，可达10^6-10^7，酵母三杂文库构建的文库多样性和插入率均高达90%以上，从而确保了文库的高品质交付。泰克生物不仅擅长酵母三杂文库构建，还提供全面的酵母杂交筛库服务，以及与之配套的表达验证和亲和力测定服务。通过酵母三杂交技术，这项服务在生物学等领域的科学研究中愈发凸显其重要性，能够为客户的科研项目助力，提供新的思路。

█ 酵母三杂交服务

酵母三杂交技术是在酵母杂交技术与酵母双杂交技术基础上的改进版，这是一种专门用来验证蛋白质之间以及蛋白质与其他生物分子间的相互作用的技术，它引入了第三个蛋白质作为调控因子，以模拟并设计三个组分间的相互作用，因此信号传导途径、转入复合体等复杂的生物学过程也能够被更容易地探索。该技术不仅可以鉴定未知蛋白的相互作用，已知相互作用的功能性的影响也能够被验证，对于一些在细胞内核酸水平的研究中发挥作用。

在酵母三杂交体系中，相较于双杂交，其增加了能同时表达两个外源蛋白的pBridge质粒。该体系的特点是将Gal4的BD结合域与MCSI位置的蛋白融合，并在无标签条件下，通过Pmet25启动子控制MCSII的蛋白在甲硫氨酸缺乏的培养基中表达。因此，在无标签实验中，酵母三杂交系统需采用甲硫氨酸缺陷型培养基，利用pGADT7载体将第三个蛋白引入AH109菌株。当菌株结合后，若能在缺Met/Ade/His/Leu/Trp的五缺培养基上生长，即表明三种蛋白间发生了相互作用。泰克生物的酵母三杂交服务流程见图1。

酵母三杂交服务流程图-泰克生物.png

图1 酵母三杂交服务流程图

█ 服务内容和周期

步骤

服务内容

周期

Step1:酵母三杂交文库构建

(1) 总RNA提取；

(2) 高保真RT-PCR制备cDNA；

(3) 载体构建与转化：载体构建（cDNA连接酵母三杂交载体：融合BD）+电击转化酵母菌株；

(4) 涂板挑取阳性克隆+阳性克隆PCR扩增（跑胶鉴定）+文库NGS测序；

(5) 交付：酵母文库质粒1管（>300ug），酵母文库甘油菌3-5ml，实验报告

5-6周

Step2:酵母三杂交文库筛选

(1) 自激活验证；

(2) 诱饵质粒与文库质粒共转酵母菌株；

(3) 酵母筛选；

(4) 筛选结果测序+回转验证；

(5) 交付：实验报告、测序原始数据

7-9周

█ 服务优势


多种种属样本可选	个性化定制	多种酵母三杂交文库可选	酵母三杂交技术成熟	配套的下游验证	实验记录可追溯	一站式技术服务
新鲜的动物组织样本、植物组织样本、细胞样本或各类样本的total RNA（需保证RNA不降解）等	根据具体的项目进行个性化设计，满足各类客户的项目需求	各类种属样本的cDNA酵母三杂交文库构建、基因组随机多肽酵母三杂交文库构建、预制随机多肽酵母三杂交文库构建	酵母三杂交文库库容可达10^6-10^7，插入率和多样性均超过90%；酵母三杂交文库质量保证，为客户的下游实验提供有力支持	文库筛选、蛋白/多肽表达验证以及亲和力验证等	QC质控标准、中英文实验报告及原始实验记录	提供从方案设计、RNA提取、cDNA制备、载体构建、菌株转化及筛选验证等服务

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